新型内表面反相限进填料的制备与评价

摘要：通过在硅烷化硅胶内表面和外表面分别键合己胺和聚乙烯醇，制备了能够在线直接进样分析生物样品的新型内表面反相限进填料。采用元素分析、电镜观察对该限进填料的结构进行了表征。以普萘洛尔、阿替洛尔、苯巴比妥、卡马西平作溶质探针，并以Ｍｅｒｃｋ公司生产的限进填料柱作参比，对合成的限进填料的色谱性能进行了研究。研究结果表明，所制备的限进填料有较好的蛋白质排阻能力、富集能力和反相色谱性能，能同时实现排阻生物大分子杂质和富集小分子被分析物的功能，可作为在线、快速直接进样检测分析生物样品的预处理柱，适用于普萘洛尔血浆的直接进样分析。

    对体内生物样品进行分析时，被分析物的浓度低，内源性干扰大；而传统生物样品前处理方法如蛋白质沉淀法、液－液萃取法、固相萃取法等均有样品用量大、操作步骤繁琐、耗费大量人力和物力、准确度和精密度不高且在离线状态下进行等缺点。因此，制备能够快速、在线分析生物样品的前处理色谱填料具有十分广阔的实际应用前景。在众多的色谱填料中，限进填料（ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ－ａｃｃｅｓｓ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ＲＡＭ）是一种新型在线样品预处理填料，它因能够避免被分析物由于前处理所造成的损失，减少传统生物样品制备时的繁琐步骤，节省人力和物力且易于实现自动化等优点［１，２］而备受关注。
　　限进填料也称为限制进入固定相，它是一个有许多不同结构类型的填料家族，但均有相似的分离机制。这类填料同时兼具分离和富集功能，通过控制填料的孔径和对其外表面进行亲水性修饰，使得亲水性外表面与生物样品中大分子物质不发生不可逆的变性和吸附，进而在死体积或近于死体积的情况下被洗脱除去；通过对其内表面进行疏水性修饰，使其具有反相色谱性能，小分子被分析物可进入填料内孔，通过疏水作用和静电作用被保留［３－５］。ＲＡＭ 家族包括内表面反相填料［６］、烷基二醇基硅胶填料［７－１２］、键合相多孔硅胶填料［１３，１４］、半渗透表面填料［１５］、蛋白质涂渍硅胶填料［１６］、混合功能填料［１７］、屏蔽疏水相填料［１８，１９］等多种类型，其中内表面反相限进填料（ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ－ａｃｃｅｓｓ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ＩＳＲＰ－ＲＡＭ）是应用最多的一类限进填料。
　　目前市售的ＩＳＲＰ－ＲＡＭ 柱价格昂贵，使用成本高，限制了其在应用研究领域的使用。本实验合成制备了能够在线、直接进样分析生物样品的一种新型内表面反相限进填料。通过３－氨丙基三乙氧基硅烷将硅胶表面的硅羟基硅烷化后，再键合上１，６－亚甲基二异氰酸酯，然后在硅胶外表面键合上亲水性的聚乙烯醇，内表面键合上非极性化合物己胺，使其外表面具有亲水性、而内表面具有疏水性；通过元素分析、电镜观察、蛋白质排阻性能考察、反相色谱性能评价对合成的限进填料进行表征，并在该限进填料柱上进行了血浆的直接进样分析。