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关键词：
聚合离子液体;石墨烯;固相萃取;有机磷农药
发表时间：
2017-02-07 11:47:20
基于流动注射光度法的吸光度_留存时间比自动测定过氧化物酶活性方法_李永生
宋丹杨 | -> | 414| 0| 0.460432MB |流动注射分析;过氧化物酶;萝卜提取液;愈创木酚;过氧化氢
过氧化物酶(POD } EC 1. 11. 1. 7)是一种广泛存在于植物和动物体内的酶，被应用在临床检验[Cil
环境监测}z}、有机合成[3]和食品分析[#]等领域，大多数生化试剂盒都含有POD，其最重要的指标就是酶
活性。因此，POD活性的快速准确定量尤为重要。POD能催化酚类或胺类显色试剂与Hz Oz的反应;常
用的显色试剂有邻苯二胺[s]、季胺}6} ,2}2联氮仁(3 -Z,基洋并曝哩石磺酸)二铰盐( ARTS)、邻苯三
酚[[A]愈创木酚(GA} C97、以及胺和酚类的祸合物[D. iol。这些显色剂在PO D催化下与HzOz反应生成的
产物都可通过比色法进行定量，但最常用的显色剂是低毒性、廉价的GA。早先认为HzOz /POD/GA体
系的产物是愈创木酚四聚体((4}A) }9'，但新的研究发现产物是愈创木酚二聚体((2}A) W-}sl。我们验
证了此结果并发现该产物不稳定，会很快分解成其它物质而褪色[D al，这导致采用手工比色法定量POD
活性时得到的结果重现性很差。此外，由于该产物不稳定，难以提纯，所以只能通过反应物GA的浓度
间接地求得反应体系中产物2 }A的摩尔吸光系数(动[IS]，并用此二值去计算PO D活性;但这又会由于
二差异导致得到的POD活性值产生较大的误差。
测定POD活性方法除比色法外[o }}，还有荧光光度法[o}. }s}和化学发光法[o9-zo等。测定PO D活性
的手工荧光法和化学发光法灵敏度高、线性范围宽;但是，由于POD催化反应的产物激发波长在紫外
区，所以被测样品中存在的杂蛋白会对荧光法产生干扰;手工化学发光法的灵敏度虽高但测定结果的重
现性较差。流动注射分析(Flow injection analysis FIA)作为一种自动化分析技术，具有操作简便、分析
速度快、精度高等优点Czzl，它能与各种检测器组合用于酶活性的自动快速测定[Czs -zsl o Holm }'}用ARTS
作为供氢体，利用流动注射光度法对发酵样品中微生物POD活性进行了测定;但此方法的不足之处是
ARTS试剂的价格昂贵且稳定性也较差。本研究选择价廉、稳定、且被广泛应用的GA作为供氢体，基于
FIA光度法建立了一种新的测定POD活性的分析流路(Flow}njection spectrophotometry for POD } FIA-
SP}OD)，并对萝卜提取液中的PO D含量及活性进行了测定。
环境监测}z}、有机合成[3]和食品分析[#]等领域，大多数生化试剂盒都含有POD，其最重要的指标就是酶
活性。因此，POD活性的快速准确定量尤为重要。POD能催化酚类或胺类显色试剂与Hz Oz的反应;常
用的显色试剂有邻苯二胺[s]、季胺}6} ,2}2联氮仁(3 -Z,基洋并曝哩石磺酸)二铰盐( ARTS)、邻苯三
酚[[A]愈创木酚(GA} C97、以及胺和酚类的祸合物[D. iol。这些显色剂在PO D催化下与HzOz反应生成的
产物都可通过比色法进行定量，但最常用的显色剂是低毒性、廉价的GA。早先认为HzOz /POD/GA体
系的产物是愈创木酚四聚体((4}A) }9'，但新的研究发现产物是愈创木酚二聚体((2}A) W-}sl。我们验
证了此结果并发现该产物不稳定，会很快分解成其它物质而褪色[D al，这导致采用手工比色法定量POD
活性时得到的结果重现性很差。此外，由于该产物不稳定，难以提纯，所以只能通过反应物GA的浓度
间接地求得反应体系中产物2 }A的摩尔吸光系数(动[IS]，并用此二值去计算PO D活性;但这又会由于
二差异导致得到的POD活性值产生较大的误差。
测定POD活性方法除比色法外[o }}，还有荧光光度法[o}. }s}和化学发光法[o9-zo等。测定PO D活性
的手工荧光法和化学发光法灵敏度高、线性范围宽;但是，由于POD催化反应的产物激发波长在紫外
区，所以被测样品中存在的杂蛋白会对荧光法产生干扰;手工化学发光法的灵敏度虽高但测定结果的重
现性较差。流动注射分析(Flow injection analysis FIA)作为一种自动化分析技术，具有操作简便、分析
速度快、精度高等优点Czzl，它能与各种检测器组合用于酶活性的自动快速测定[Czs -zsl o Holm }'}用ARTS
作为供氢体，利用流动注射光度法对发酵样品中微生物POD活性进行了测定;但此方法的不足之处是
ARTS试剂的价格昂贵且稳定性也较差。本研究选择价廉、稳定、且被广泛应用的GA作为供氢体，基于
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