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关键词：
聚合离子液体;石墨烯;固相萃取;有机磷农药
发表时间：
2017-02-07 11:47:20
基于_核酸外切酶辅助放大的化学发光传感器用于DNA的灵敏检测_陈佳
宋丹杨 | -> | 447| 0| 1.400404MB |a核酸外切酶;rte链体/血红素DNA酶;化学发光;;DNA
DNA是生物体遗传信息的载体[CIl，构建快速、灵敏、高选择性的生物分析新方法用于低丰度的DNA
序列的检测在临床诊断、基因筛选、食品和环境监测、国土安全等方面起着至关重要的作用[}z,o。近年
来，信号放大己经成为提高DNA检测灵敏度的重要手段，如采用纳米材料作为信号放大的标记物、采用
聚合酶链反应(PC R)或者滚环扩增(RCA)等核酸扩增技术等。虽然这些方法大大提高了检测的灵敏
度，但是也存在操作繁琐、费时、价格昂贵、易出现假阳性信号等缺陷C4 ,5]。使用限制性内切酶进行信号
放大的方法，较以往的信号放大方法更为简单、快速，但是由于限制性内切酶只能针对特定的DNA序
列，在实际应用中存在一定的局限性[o,o。因此，发展快速、灵敏的DNA测定新方法具有重要的理论和
实际意义[[A]
入核酸外切酶( Lambda exonuclease } zt exo)是一种高持续性核酸外切酶，能够催化双链DNA分子自
5'磷酸末端、3’方向逐步水解，并释放出5'率核普酸，进而将双链DNA变成单链DNA}9'I0} o dex。在核
酸重组、复制、分型、基因修复以及分子克隆等方面起着至关重要的作用，己成为研究基因组成、功能及
表达的重要工具之一。此外，许多研究者将} exo的独特性质应用于核酸探针的信号放大技术，以实现
核酸、蛋白质等生物分子的超灵敏检测DI-lal。但是这些方法大多需要对核酸探针进行荧光标记，过程
复杂且成本较高。
G咽链体/血红素DNA酶(G刀uadruplexes/hemin DNAzyme)是一种具有催化性能的人工模拟酶，
由富含鸟A}吟碱基的核酸分子与血红素结合，形成稳定的G月丝}链体结构，表现出类似于辣根过氧化物酶
的活性，能够催化Hz Oz氧化2}2'联氮双(3 -Z,基苯并曝哩琳石磺酸)二铰盐(ARTS)产生颜色变化或者催
化H2 V2氧化鲁米诺(Luminol)产生化学发光[[IS-17]，在生化分析领域己经引起研究者的广泛关注〔I A]
化学发光(Chemiluminescence } CL)分析由于不需要激发光源，避免了背景光和杂散光的干扰，大大
提高了信噪比，具有灵敏度高、线性范围宽、分析速度快、仪器设备简单等优势，目前己广泛应用于免疫
分析、临床检验、环境检测、物质分析等领域[D 9 -zzl。本研究采用3条核酸链构建DNA夹心结构，使用
} exo进行目标DNA的辅助放大，建立了新型化学发光传感器，成功实现了DNA检测。本方法具有操
作简单、灵敏度高、特异性奸等优势，可用于实际样品分析。
序列的检测在临床诊断、基因筛选、食品和环境监测、国土安全等方面起着至关重要的作用[}z,o。近年
来，信号放大己经成为提高DNA检测灵敏度的重要手段，如采用纳米材料作为信号放大的标记物、采用
聚合酶链反应(PC R)或者滚环扩增(RCA)等核酸扩增技术等。虽然这些方法大大提高了检测的灵敏
度，但是也存在操作繁琐、费时、价格昂贵、易出现假阳性信号等缺陷C4 ,5]。使用限制性内切酶进行信号
放大的方法，较以往的信号放大方法更为简单、快速，但是由于限制性内切酶只能针对特定的DNA序
列，在实际应用中存在一定的局限性[o,o。因此，发展快速、灵敏的DNA测定新方法具有重要的理论和
实际意义[[A]
入核酸外切酶( Lambda exonuclease } zt exo)是一种高持续性核酸外切酶，能够催化双链DNA分子自
5'磷酸末端、3’方向逐步水解，并释放出5'率核普酸，进而将双链DNA变成单链DNA}9'I0} o dex。在核
酸重组、复制、分型、基因修复以及分子克隆等方面起着至关重要的作用，己成为研究基因组成、功能及
表达的重要工具之一。此外，许多研究者将} exo的独特性质应用于核酸探针的信号放大技术，以实现
核酸、蛋白质等生物分子的超灵敏检测DI-lal。但是这些方法大多需要对核酸探针进行荧光标记，过程
复杂且成本较高。
G咽链体/血红素DNA酶(G刀uadruplexes/hemin DNAzyme)是一种具有催化性能的人工模拟酶，
由富含鸟A}吟碱基的核酸分子与血红素结合，形成稳定的G月丝}链体结构，表现出类似于辣根过氧化物酶
的活性，能够催化Hz Oz氧化2}2'联氮双(3 -Z,基苯并曝哩琳石磺酸)二铰盐(ARTS)产生颜色变化或者催
化H2 V2氧化鲁米诺(Luminol)产生化学发光[[IS-17]，在生化分析领域己经引起研究者的广泛关注〔I A]
化学发光(Chemiluminescence } CL)分析由于不需要激发光源，避免了背景光和杂散光的干扰，大大
提高了信噪比，具有灵敏度高、线性范围宽、分析速度快、仪器设备简单等优势，目前己广泛应用于免疫
分析、临床检验、环境检测、物质分析等领域[D 9 -zzl。本研究采用3条核酸链构建DNA夹心结构，使用
} exo进行目标DNA的辅助放大，建立了新型化学发光传感器，成功实现了DNA检测。本方法具有操
作简单、灵敏度高、特异性奸等优势，可用于实际样品分析。
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