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关键词：
人乳头状瘤病毒,基因分型,质控品,荧光PCR,酶切信号放大
发表时间：
2013-06-26 16:59:40
采用基因分型质控品评价荧光PCR法人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒
褚成媛 | -> | 431| 0| 416.668MB |人乳头状瘤病毒,基因分型,质控品,荧光PCR,酶切信号放大
摘要 目的: 使用人乳头瘤病毒( HPV ) L1基因分型质控品对荧光PCR 法人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒进行评价。方法: 以中国药品生物制品检定所体外诊断试剂与培养基室建立的含有30种不同型别HPV基因分型质控品盘为样本, 按照各个试剂盒的要求进行检测。结果: 使用含有30种不同型别HPV基因分型质控品盘为模板进行试剂盒评价时, A 试剂检测有23种型别检测结果符合, 7种型别不符合, HPV 59型漏检, H PV 53, 54, 61, 66, 72, 81型有交叉现象。B 试剂检测有29种型别检测结果符合, 1种型别不符合, HPV 58型漏检。C 试剂检测有26种型别检测结果符合, 4种型别不符合, H PV 43, 66, 81, CP 8304型有交叉现象。D试剂有29种型别检测结果符合, 1种型别不符合, H PV 68型漏检。对照检测E 试剂30 种型别的检测结果全部符合。4家公司的试剂基本能正确区分质控品中HPV 基因型, 但有部分的HPV 基因型有漏检现象和交叉反应。对照试剂无漏检交叉现象。结论: 含有30种不同型别的HPV- L1基因分型质控品能准确地评价4家公司的H PV核酸检测试剂盒(荧光PCR法)和高危型人乳头瘤病毒DNA 检测试剂盒(酶切信号放大法) 的性能; 在HPV 核酸检测试剂盒(荧光PCR法)的研发中应在通过质控盘的考核情况下加大临床样本的验证, 从而对其产品进行进一步的验证和考核。
人乳头瘤病毒( human papillom av irus, HPV )是一种不具备外膜的环状双链结构的DNA 病毒, , 病毒颗粒直径约为45~ 55 nm, 由7800~ 7900碱基对组成。目前已鉴定的HPV 达100多种型别[ 1 ] 。依据HPV 与癌症的相关性, HPV 可以分为低度危险型( 6, 11, 42, 43, 44等型)和高度危险型( 16, 18, 31,33, 35等型)[ 2, 3] 。大量的研究发现宫颈癌的发生与HPV 的关系非常密切, 在9917% 的宫颈癌标本中可检出不同型别的HPV[ 4] 。考虑到HPV 的型别多样性以及分布的地域差异性[ 5] , 临床HPV基因的准确分型, 对于发现宫颈癌高危病人及早期防治有着十分重要意义。
大多数HPV 基因型的检测都是通过对其病毒核酸进行检测来实现的, 特别是DNA。HPV 基因型
检测的方法可大致分为以靶序列扩增为基础的检测方法和以信号放大为基础的检测方法[ 6] 。而HPV荧光PCR分型检测方法正是基于靶序列扩增基础上的一种PCR 技术, 与常规PCR 技术相比它具有
特异性更强, 有效解决PCR 污染问题, 自动化程度高等特点。酶切信号放大法是一种新型的信号放大技术, 与液相信号放大技术- 杂交捕获2代( hybridcapture 2, HC2) 检测技术同为美国FDA 认证的HPV 分型的检测技术[ 7] 。目前市面上已有使用酶切信号方法和荧光PCR 技术检测HPV 分型的产品, 但尚未有统一的国家评价标准对其性能进行评估的研究。本研究拟采用中国药品生物制品检定所体外诊断试剂与培养基室建立的HPV-L1基因分型质控品[ 8] 对荧光PCR 法和酶切信号放大法的HPV基因检测试剂进行检测, 从而对其性能质量进行初步的评估。
大多数HPV 基因型的检测都是通过对其病毒核酸进行检测来实现的, 特别是DNA。HPV 基因型
检测的方法可大致分为以靶序列扩增为基础的检测方法和以信号放大为基础的检测方法[ 6] 。而HPV荧光PCR分型检测方法正是基于靶序列扩增基础上的一种PCR 技术, 与常规PCR 技术相比它具有
特异性更强, 有效解决PCR 污染问题, 自动化程度高等特点。酶切信号放大法是一种新型的信号放大技术, 与液相信号放大技术- 杂交捕获2代( hybridcapture 2, HC2) 检测技术同为美国FDA 认证的HPV 分型的检测技术[ 7] 。目前市面上已有使用酶切信号方法和荧光PCR 技术检测HPV 分型的产品, 但尚未有统一的国家评价标准对其性能进行评估的研究。本研究拟采用中国药品生物制品检定所体外诊断试剂与培养基室建立的HPV-L1基因分型质控品[ 8] 对荧光PCR 法和酶切信号放大法的HPV基因检测试剂进行检测, 从而对其性能质量进行初步的评估。
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