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关键词：
五氯酚,斑马鱼,基因芯片,发育毒性,生物信息学
发表时间：
2012-08-14 10:01:36
来自BacilluscirculansWZ_省略_2的二氯甲烷脱卤酶基因dcmR
张儒佳 | -> | 1516| 0| 0.253697MB |二氯甲烷,脱卤酶基因dcmR,基因克隆与表达,生物降解
摘要: 通过PCR 方法从Bacillus circulans WZ- 12 中分离到二氯甲烷脱卤酶基因dcmR, 构建具T7 强启动子的pET28b( + )- dcmR质粒, 电击转化Escherichia. coli BL21( DE3) , 构建了二氯甲烷生物降解基因工程菌BL21[ pET28b( + )- dcmR] . 重组菌经IPTG 诱导后, 表达蛋白占总蛋白的32%. 表达蛋白的酶活最高可达251 78 UPmL, 酶的比活( 以蛋白计) 为88186 UPmg . 重组菌周质中酶活21 92 UPmL, 胞内酶活22186 UPmL. 重组菌产生的酶的活力和比活较原降解菌株高1~ 2 倍. 对工程菌的生长特性和降解特性的研究表明, 工程菌在LB 培养基中的生长特性与原始菌株没有差别, 生长至对数期A600 nm 值都可达214 左右. 重组菌株dcmR- 1在25 h 的降解率达90%以上, 降解效率比原降解菌株有明显提高. 该基因工程菌的构建对二氯甲烷生物降解机制研究以及复合污染环境的生物修复和工程应用具有实际意义.
二氯甲烷( CH2Cl2 ) 是一类应用非常广泛的化学试剂, 主要在金属材料去油污、纺织、印染、油漆行业和制药工业等领域作溶剂使用. 当前, 二氯甲烷被认为是大气污染中毒性较大的卤代烃类物质, 严重危及人类健康. 有报道称环境中CH2Cl2 超过10 mgPL浓度即可对人体生理过程造成不同程度的干扰[ 1] .城市废水中CH2Cl2 浓度远远超过24 LgPL[ 2] . CH2Cl2严重破坏臭氧层, 被美国EPA 列为优先控制污染物. Methylobacterium 和Hyphomicrobium 属的某些菌株能利用二氯甲烷作为唯一碳源生长, 这些细菌含有参与生物降解反应的关键酶) ) ) 二氯甲烷脱卤素酶( EC 4151113) , 此酶属于谷胱甘肽转移酶类( GST; EC21511118) , 是一种诱导酶, 能催化二氯甲烷转化生成甲醛和无机氯. 反应途径如下:
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