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关键词：
杀菌剂,除草剂,杀虫剂,筛选规则,毒性,先导化合物
发表时间：
2012-06-20 09:53:02
摘 要: 选择了甘油、山梨醇、聚乙二醇( PEG )、卵清蛋白( OVA )、多肽、糖、氨基酸等试剂, 通过经验法和正交法相结合的手段配制了一系列稳定剂, 对吸附在酶标板上的三唑磷多克隆抗体进行处理( 37e , 1 h)后, 再在37e 下连续贮存7 d, 利用直接竞争ELISA 法对不同稳定剂处理的包被抗体免疫活性、亲合性及检测灵敏度进行检测, 并与未经稳定剂处理的对照进行比较, 筛选得到效果较好的稳定剂1 (质量分数: 甘油2. 5% , 氨基酸1. 5%, 蛋白胨3. 0% , 离子螯合剂0. 1%, 防腐剂0. 01% )。用稳定剂1处理包被抗体后, 4~ 6e 下保存半年及37e 下保存14 d的试验结果表明,抗体的活性相对保持率分别为9718% 和9412%; 其免疫活性、亲合性( I50 分别为68143 和54138 ng /mL)及灵敏度( I10分别为3172和3122 ng /mL) 与常规方法包被的抗体(包被好后不贮存, 直接检测, I50为60173 ng /mL, I10为3111 ng /mL )无明显差异; 冻融试验表明, 经稳定剂1处理的三唑磷抗体在反复冻-融次数不超过8次时其活性也是稳定的。说明筛选出的稳定剂可以显著提高三唑磷多克隆包被抗体的稳定性, 可用于三唑磷ELISA 试剂盒的生产。
三唑磷[ triazopho s, O, O-二乙基-O-( 1-苯基-1, 2, 4三唑-3-基)硫代磷酸酯] 是一种广谱性杀虫杀螨剂, 对危害粮、棉、油、果蔬、茶叶等主要农作物的害虫具有良好的防治效果[1] , 但对鱼类、蜜蜂、家蚕具有高毒性[ 2] 。目前国外已经开始限制或禁止其使用和销售[ 3] 。我国在甲胺磷、对硫磷等高毒有机磷杀虫剂被限制或禁止使用后, 三唑磷的使用量迅速增加, 环境和食品中三唑磷的残留问题也日益受到人们的关注[ 4~ 9] 。建立三唑磷残留的快速检测技术, 对加强三唑磷残留的检测与监控, 保障人类身体健康具有重要意义。近年来发展起来的酶联免疫吸附测定法( EL ISA )具有很高的特异性和灵敏度, 同时又具有快速、简便的特点, 广泛应用于环境监测、医疗诊断、生化研究等领域[ 10, 11] 。本实验室已经成功开发出三唑磷残
留检测直接竞争EL ISA 试剂盒, 并且已经进入商品化阶段。EL ISA 试剂盒进行商品生产的关键技术之一是使试剂盒在保存期( 6~ 12 个月) 内包被在酶标板上的抗体( 或抗原) 免疫活性不发生变化。国外相关公司已经解决了这方面的问题[ 10~ 12 ], 但出于商业保密的原因, 对其中稳定剂的报道却极少。本研究在三唑磷EL ISA 检测抗体包被稳定剂方面进行了一些探索, 以期为试剂盒商品化生产打下基础, 同时也为其他试剂盒的研制提供方法。
留检测直接竞争EL ISA 试剂盒, 并且已经进入商品化阶段。EL ISA 试剂盒进行商品生产的关键技术之一是使试剂盒在保存期( 6~ 12 个月) 内包被在酶标板上的抗体( 或抗原) 免疫活性不发生变化。国外相关公司已经解决了这方面的问题[ 10~ 12 ], 但出于商业保密的原因, 对其中稳定剂的报道却极少。本研究在三唑磷EL ISA 检测抗体包被稳定剂方面进行了一些探索, 以期为试剂盒商品化生产打下基础, 同时也为其他试剂盒的研制提供方法。
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