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羟基自由基引起的脱氧核糖核酸损伤研究

于陆 | -> | 1134| 0| 0.771568MB |脱氧核糖核酸损伤,羟基自由基,光催化,8-羟基脱氧鸟苷

于陆 于陆 | 文档量 |浏览量40335

摘要以鲱鱼精脱氧核糖核酸( Herring sperm DNA) 为研究对象,利用紫外光( UV,200 ~ 275 nm,66. 4 Lx)激发纳米TiO2发生光催化作用介导产生羟基自由基( Hydroxyl radical,·OH) ,探讨·OH 引发DNA 氧化损伤特性。采用凝胶电泳和高效液相色谱( HPLC) 分析法跟踪DNA 损伤历程; 应用电子自旋共振( Electron spin resonance,ESR) 及分光光度法跟踪损伤过程氧化物种及H2O2相对浓度的变化; 运用生物标准样8-羟基脱氧鸟苷( 8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG) 为内标物,通过HPLC 分析DNA 损伤产物,研究DNA 损伤机理。结果表明,较单纯UV 辐照或暗光( Dark) 催化条件,DNA 浓度10 mg /L,TiO2浓度1. 5 g /L、pH 7 ~ 8,紫外光激发纳米TiO2介导产生·OH 引发DNA 损伤程度最大; DNA 损伤为·OH 氧化历程,并伴随有深度氧化过程;DNA 结构中鸟嘌呤最易氧化损伤,8-OHdG 为DNA 氧化损伤中间产物及鸟嘌呤氧化损伤的特异产物。
    脱氧核糖核酸( DNA) 是所有生物的遗传物质基础,能调控生物的发育和生命机能的运作[1]。环境中多种因素如辐射、温度、重金属诱导DNA 损伤[2]。生物体中自由基参与许多重要的生命过程,自由基过多会使有机体发生损伤,主要表现在·OH 导致DNA 的碱基和脱氧核糖发生化学变化,引起碱基改变、破坏或脱落及脱氧核糖分解等[3]。目前对自由基导致DNA 损伤的研究主要从延伸辐射产生介导自由基、自由基的种类引发DNA 损伤[4,5]及DNA 损伤过程其结构变化几个方面展开探讨[6],而从光照激发光催化作用介导产生·OH 导致DNA 损伤机理的研究尚未见报道。
    本研究以鲱鱼精DNA( Herring sperm DNA) 为研究对象,利用紫外光( UV,200 ~ 275 nm,66. 4 Lx)激发TiO2发生光催化反应介导产生·OH,研究·OH 与DNA 相互作用机理,重点通过凝胶电泳和HPLC 检测DNA 损伤程度,采用电子自旋共振( Electron spin resonance,ESR) 及分光光度法跟踪损伤过程氧化物种及H2O2相对浓度的变化,同时以生物标准样8-羟基脱氧鸟苷( 8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG) 为内标物,探究·OH 攻击DNA 结构损伤位点,进一步明确·OH 引起DNA 氧化损伤机理。
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