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关键词：
重组,NuBCP,Tumstatin,融合,多肽,构建,表达,活性,研究,
发表时间：
2010-12-09 15:56:07
重组NuBCP-9 / Tumstatin (74-98)融合多肽的构建、表达和活性研究
农药 | -> | 3653| 0| 0.372747MB |重组,NuBCP,Tumstatin,融合,多肽,构建,表达,活性,研究,
摘 要 目的:构建抗肿瘤融合肽NuBCP-9 /Tumstatin (74-98) (简称NT)原核表达载体并转化大肠杆菌BL21 (DE3) ,获得具有多靶点抗肿瘤活性的融合肽。方法:将抗肿瘤小肽NuBCP29和Tumstatin (74298)用柔性肽(G4 S) 3 连接,根据大肠杆菌偏爱密码子,采用重叠延伸PCR技术扩增融合肽序列,并将其克隆至pET32a ( + )质粒中,构建pET32a2NT表达载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3) ,诱导表达, SDS-PAGE分析目的蛋白表达量并优化表达条件,经亲和色谱、酶切和超滤等方法分离、纯化得到重组融合肽;采用MTT法测定融合肽对人脐静脉内皮细胞ECV304 和人肺癌细胞A549 的抑制活性影响。结果:成功构建了重组表达载体pET32a-NT,优化表达条件获得了25%的可溶性蛋白表达量。活性研究表明,在融合肽终浓度为20μmol/L时,对ECV304和A549的抑制率分别为60.8%和65.2%。结论:融合肽初步表现出抗肿瘤活性,为进一步药效药理学研究奠定了基础。
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