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关键词：
毛细管电泳,间接紫外检测,氨基酸,蜂蜜
发表时间：
2013-11-21 16:32:44
摘要: 采用毛细管电泳-间接紫外检测法同时分离测定蜂蜜中的赖氨酸、色氨酸、谷氨酸等9 种氨基酸。考察了磷酸浓度、进样方式和缓冲液pH 对分离效率和重现性的影响。在分离电压为－ 15 kV、检测波长为220 nm 条件下，以含有0. 5 mmol /L 十六烷基三甲基溴化铵、20 mmol /L 烟酸、10%甲醇的10 mmol /L 磷酸二氢钠缓冲溶液( pH 10. 2)为运行缓冲液，9种组分在11 min 内达到基线分离; 检出限最低可达到0. 3 mg /L; 线性范围为1. 0 ～ 1 000 mg /L; 日间及日内精密度为0． 64%～ 5． 83%。实际样品中除甲硫氨酸外的8 种氨基酸的加标回收率为60. 00% ～ 118. 37%。将该方法应用于不同蜜源植物和产地的蜂蜜样品的测定，在市售的5 种蜂蜜中均检测到脯氨酸、丝氨酸和天冬氨酸，而只在荔枝蜜中检测到苏氨酸。该方法可以为蜂蜜的蜜源鉴别及质量评估提供借鉴方法。
蜂蜜作为一种潜在的生物抗氧化［1，2］、抗菌［3］的功能性食品，其抗氧化能力不仅受黄酮多酚类化合物的影响，同时也受蜂蜜中氨基酸成分的影响，而且相关性强于多酚类化合物4］。蜂蜜中氨基酸的含量和种类依蜂蜜的品种和花粉不同而异，尽管依据氨基酸含量不能完全鉴别蜜源，但是不同种类蜂蜜的氨基酸含量的差异在蜜源鉴别方面也能起到一定的作用［5，6］。自动化分析氨基酸是采用阳离子交换色谱分离与柱后茚三酮衍生结合的方法实现的，最初用于分析蛋白质中的氨基酸。随后，人们不断地发展新的氨基酸分析方法，如: 氨基酸自动分析仪［7］、柱前衍生反相高效液相色谱法［8］、高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法［9］、高效液相色谱与质谱联用法［10］、高效液相色谱-蒸发光散射检测法［11］等技术相继应用于氨基酸分析。这些方法发展成熟并广泛用于生化、医学、生物工程、农业和食品等领域。但是大多会存在着试剂消耗多、操作成本高、分析方法复杂、分析时间长等问题。由于大部分氨基酸没有紫外吸收，因此不能采用简单、方便的直接紫外检测，需进行衍生化处理。目前使用的柱前衍生试剂主要有邻苯二甲醛( OPA) ［12， 13］、异硫氰酸苯酯( PITC) ［14］、氯甲酸芴甲酯( FMOC-Cl) ［15］、丹酰氯
( Dansyl-Cl) ［16］等。但衍生化反应存在产物不稳定、剩余试剂对检测造成干扰、衍生化条件苛刻等局限性，而间接检测可克服这些缺点［17 － 19］。本文应用高效毛细管电泳( HPCE) -间接紫外检测法于11 min 内同时分离检测了蜂蜜中9 种游离氨基酸。
( Dansyl-Cl) ［16］等。但衍生化反应存在产物不稳定、剩余试剂对检测造成干扰、衍生化条件苛刻等局限性，而间接检测可克服这些缺点［17 － 19］。本文应用高效毛细管电泳( HPCE) -间接紫外检测法于11 min 内同时分离检测了蜂蜜中9 种游离氨基酸。
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