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关键词：
原子吸收分光光度法,天山堇菜,微量元素
发表时间：
2013-04-28 09:55:33
强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱纯化血清中免疫球蛋白和白蛋白_秦宗华
强德业 | -> | 1188| 1| 0.347166MB |阴离子交换色谱,分子排阻色谱,免疫球蛋白,白蛋白,动物血清,纯化
摘要：动物血清中免疫球蛋白和白蛋白的等电点分别约为７．８和４．８，根据它们等电点的较大差别，利用Ｑ ＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ－ＸＬ强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱同时分离纯化这２种蛋白。以０．０２ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ ８．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液平衡离子交换色谱柱并将已稀释１０倍的高免疫的兔血清上样，采用ｐＨ 分段洗脱。在ｐＨ ６．０时以０．３ｍＬ／ｍｉｎ低流速洗脱得到高纯度的免疫球蛋白，继续在ｐＨ ４．０时洗脱，再辅以Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５分子排阻色谱可获得纯度大于９５％的白蛋白。对纯化后的蛋白进行活性检测，证明所纯化的免疫球蛋白和白蛋白都保持正常的生物活性。蛋白质含量测定说明免疫球蛋白的纯化回收率达到９５％以上，而白蛋白的纯化回收率大于９０％。该法简便快速，可同时从动物血清中纯化出保持生物活性的免疫球蛋白和白蛋白，纯化效率高。
动物血液组成成分复杂，蛋白质种类众多。血清白蛋白（ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ，ＳＡ）和免疫球蛋白（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，Ｉｇ）是血清中含量最多的２种蛋白，在药用、生化检测、科学研究中地位十分重要［１，２］，所以关于它们的分离纯化技术研究甚多。纯化ＳＡ从以冷乙醇沉淀法为主发展到目前的色谱法，如离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等多种色谱分离技术［３］，可以得到较好的纯化效果。同样的，对于Ｉｇ的纯化技术也有较多，特别是Ａ蛋白亲和色谱法是最常用的分离纯化Ｉｇ的方法之一［４－６］。Ａ 蛋白是金黄葡萄球菌细胞壁的一种蛋白成分，可以和Ｉｇ的Ｆｃ片段结合，将Ａ 蛋白作为配基结合在介质上可用于分离Ｉｇ。但这些方法一般是只针对一种蛋白的纯化。如果以一个方法能同时从血清中分离纯化ＳＡ和Ｉｇ，则效率会大大提高。考虑到Ｉｇ和ＳＡ的等电点分别约为７．８和４．８［７］，差距较大，所以本研究尝试用离子交换色谱结合分子排阻色谱从血清中同时纯化这２种蛋白。
离子交换色谱是依赖不同蛋白吸附于离子交换剂能力的不同［８］进行纯化的一种简单而又迅速的技术，具有交换容量大、重复利用率高［９］等优点。ＱＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ－ＸＬ树脂是一种高容量强阴离子吸附剂，以琼脂糖凝胶Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＸＬ作为载体偶联葡聚糖链，强阴离子基团以醚键牢固结合于葡聚糖链上。根据ＳＡ和Ｉｇ等电点存在较大差异的特点和此树脂的性质，本研究以上样液、洗脱液的ｐＨ 为焦点探索利用Ｑ ＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ－ＸＬ强阴离子交换色谱同时分离纯化血清中ＳＡ和Ｉｇ的方法。
离子交换色谱是依赖不同蛋白吸附于离子交换剂能力的不同［８］进行纯化的一种简单而又迅速的技术，具有交换容量大、重复利用率高［９］等优点。ＱＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ－ＸＬ树脂是一种高容量强阴离子吸附剂，以琼脂糖凝胶Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＸＬ作为载体偶联葡聚糖链，强阴离子基团以醚键牢固结合于葡聚糖链上。根据ＳＡ和Ｉｇ等电点存在较大差异的特点和此树脂的性质，本研究以上样液、洗脱液的ｐＨ 为焦点探索利用Ｑ ＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ－ＸＬ强阴离子交换色谱同时分离纯化血清中ＳＡ和Ｉｇ的方法。
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