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凝胶色谱柱

想买凝胶色谱柱？有没有柱子比较好，价格相对又比较便宜的呢？凝胶色谱柱厂家在那里？有没有产品信息？

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马金婵

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俄晓

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张彤彤

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魏伟

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3 个回答

成都摩尔

SRT-C凝胶色谱柱

在实际的蛋白分离、分析工作中，科研工作者经常会遇到某些疏水性蛋白及聚合物改性蛋白在常规SEC柱上出峰状态与理论不符的情况。针对此种情况，成都摩尔科学仪器有限公司提供的的SRT系列色谱柱的基础上，专门推出针对该类样品的SRT-C SEC系列色谱柱。该键合固定相采用专利的表面修饰技术，通过在高纯度的硅胶基质上键合均匀的纳米厚度中性亲水涂层而制备得到。由于采用可控的化学修饰技术，确保了填料批间有着可靠的重现性。SEC填料采用化学键合技术，表面亲水涂层覆盖完全，因此不仅具有优异的稳定性，而且对蛋白等生物样品的非特异性吸附作用也非常小。同时，大的孔体积保证了高的载样量及优异的分辨率。

SRT-C技术参数表

固定相	SRT-C 150	SRT-C 300	SRT-C 500
材料	表面键合亲水薄膜的硅胶	表面键合亲水薄膜的硅胶	表面键合亲水薄膜的硅胶
颗粒大小	5 μm	5 μm	5 μm
孔径 (Å)	~ 150	~ 300	~ 500
蛋白质分子量范围	500 - 150,000	5,000 – 1,250,000	15,000 – 5,000,000
水溶性聚合物分子量范围	500-25,000	1,000-100,000	25,000-500,000
pH 稳定性	2 – 8.5 短时可耐8.5-9.5	2 – 8.5 短时可耐8.5-9.5	2 – 8.5 短时可耐8.5-9.5
反压 (psi for a 7.8x300 mm)	~ 700	~ 700	~ 700
压力 (psi)	~ 4,500	~ 3,500	~ 3,000
盐浓度范围	20 mM - 2.0 M	20 mM - 2.0 M	20 mM - 2.0 M
使用温度 (^oC)	~ 80	~ 80	~ 80
流动相兼容性	常规水相及有机相溶剂	常规水相及有机相溶剂	常规水相及有机相溶剂

● 高载量及高分辨率
● 稳定的的批间重现性
● 高的蛋白回收率，且蛋白不易失活
● 极低的非特异性吸附
● 专为疏水性蛋白及改性蛋白（如PEG化抗体）设计
● 适用于常规生物样品的分离与制备

SRT-C SEC的蛋白分子量校正曲线

色谱柱:   7.8x300 mm, 5 μm
流动相:   150 mM phosphate buffer, pH 7.0
流速:     1.0 mL/min
检测波长: UV 214 nm
进样量:   10 μL
样品:     1). Thyroglobulin, 670 kD; 2). g-Globulin, 158 kD; 3). BSA, 66 kD; 4). Ovalbumin, 44 kD; 5). Myoglobin, 17.6 kD; 6). Ribonuclease A, 13.7 kD; 7). B12, 1.35 kD; 8). Uracil, 120

订购信息：

SRT-C SEC-150


产品名称	粒度	孔径	规格	订货号
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	21.5x600 mm	235150-21560
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	21.5x300 mm	235150-21530
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	7.5x600 mm	235150-7560
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	7.8x300 mm	235150-7830
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	7.8x150 mm	235150-7815
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	7.8x50 (保护柱)	235150-7805
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	4.6x300 mm	235150-4630
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	4.6x150 mm	235150-4615
SRT-C SEC-150	5 μm	150 Å	4.6x50 (保护柱)	235150-4605

SRT-C SEC-300


产品名称	粒度	孔径	规格	订货号
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	21.5x600 mm	235300-21560
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	21.5x300 mm	235300-21530
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	7.5x600 mm	235300-7560
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	7.8x300 mm	235300-7830
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	7.8x150 mm	235300-7815
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	7.8x50 (保护柱)	235300-7805
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	4.6x300 mm	235300-4630
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	4.6x150 mm	235300-4615
SRT-C SEC-300	5 μm	300 Å	4.6x50 (保护柱)	235300-4605

SRT-C SEC-500


产品名称	粒度	孔径	规格	订货号
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	21.5x600 mm	235500-21560
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	21.5x300 mm	235500-21530
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	7.5x600 mm	235500-7560
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	7.8x300 mm	235500-7830
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	7.8x150 mm	235500-7815
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	7.8x50 (保护柱)	235500-7805
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	4.6x300 mm	235500-4630
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	4.6x150 mm	235500-4615
SRT-C SEC-500	5 μm	500 Å	4.6x50 (保护柱)	235500-4605

注：以上为常备规格订货信息，其它规格或特殊定制产品，电询。

Zenix SEC系列高分辨率色谱柱

体积排阻Zenix 色谱柱

成都摩尔科学仪器有限公司体积排阻Zenix 描述：

Zenix体积排阻色谱柱采用单分散、球形、表面键合了一层纳米厚度中性亲水性薄膜的3 μm硅胶作为填料。3μm的粒径结合大的孔体积使其成为目前国际上分辨率优良的体积排阻柱。成都摩尔科学仪器有限公司独有的表面键合技术保证了填料表面键合的很大化，使其具有高的化学稳定性及小的非特异性吸附。Zenix系列体积排阻柱有100、150及300Å三种孔径选择，广泛的应用于生物分子及水溶性聚合物的分离与分析。

Zenix SEC技术参数表

固定相	Zenix SEC-80	Zenix SEC-100	Zenix SEC-150	Zenix SEC-300
材料	表面键合亲水薄膜的硅胶	表面键合亲水薄膜的硅胶	表面键合亲水薄膜的硅胶	表面键合亲水薄膜的硅胶
颗粒大小	3 μm	3 μm	3 μm	3 μm
孔径 (Å)	~ 80	~ 100	~ 150	~ 300
蛋白分子量范围	100 – 50,000	100 - 100,000	500 - 150,000	5,000 – 1,250,000
水溶性聚合物分子量范围	500 – 5,000	500-10,000	500-25,000	1,000-100,000
pH 稳定性	2 –8.5，短时间可耐pH 8.5-9.5	2 – 8.5，短时可耐pH 8.5-9.5	2 – 8.5，短时可耐pH 8.5-9.5	2 – 8.5，短时可耐pH 8.5-9.5
反压 (for a 7.8x300 mm)	~ 1,500 psi	~ 1,500 psi	~ 1,500 psi	~ 1,500 psi
耐受压力 (psi)	~ 4,500	~ 4,500	~ 4,500	~ 3,500
盐浓度范围	20 mM - 2.0 M	20 mM - 2.0 M	20 mM - 2.0 M	20 mM - 2.0 M
使用温度 (^oC)	~ 80	~ 80	~ 80	~ 80
流动相的兼容性	常规水相及有机相溶剂	常规水相及有机相溶剂	常规水相及有机相溶剂	常规水相及有机相溶剂

成都摩尔科学仪器有限公司体积排阻Zenix 特点

● 3 μm粒径
● 100、150、300 Å的孔径选择
● 极高的分离效率和分辨率
● 高容量
● 在低和高盐浓度下有高稳定性
● 批间重复性
● 高的蛋白回收率而不破坏生物活性
● 可忽略的非特异性反应
● 蛋白、核酸、寡核苷酸、多肽和病毒类生物分子能实现理想的分析和分离
● 自然多聚体（如：多糖）、合成多聚体和纳米材料（如：纳米颗粒）能够实现理想的分析和分离

很高的分辨率

开发小粒径填料的优势在于能实现更高的分离效率和分辨率。当粒径从5 μm降至3 μm时，柱效几乎为原先的两倍。如图1和表1所示：当填料粒径从5 μm降至3 μm时，BSA二聚体、BSA、核糖核酸酶A的塔板数分别从2720、6590、11160提高到4600、13090、22000。图2和表2进一步表明3 μm Zenix柱在分离各种蛋白时能实现更高的分离效率。P-氨基苯甲酸使用30 cm长的Zenix柱时能够达到40,000的塔板数。

图1. Zenix SEC-300和SRT SEC-300分离蛋白混合物A

色谱柱:    Zenix SEC-300和SRT SEC-300
流动相:    150mM Sodium phosphate buffer, pH 7.0
流速:        7.8x300 mm为1.0 mL/min; 4.6x300 mm为0.35 mL/min
温度:        室温(~23℃);
检测器:    UV 214 nm
进样量:    10 μL (4.6x300 mm为3 μL)
样品:      1) 甲状腺球蛋白(1.0 mg/mL), 670 kD; 2) BSA二聚体, 132 kD;          3) BSA (1.0 mg/mL), 66 kD; 4) 核糖核酸酶A (1.0 mg/mL), 13.7 kD; 5) 尿嘧啶(2.5 μg/mL), 120 D

表1. Zenix SEC-150和Zenix SEC-300分离效率

峰	蛋白	Zenix 300	Zenix 300	SRT 300
峰	蛋白	(4.6x300)	(7.8x300)	(7.8x300)
1	甲状腺球蛋白	2180	1730	1120
2	BSA二聚体	4390	4600	2720
3	BSA	10280	13090	6590
4	核糖核酸酶A	16490	22000	11160
5	尿嘧啶	33640	38500	27860

图2. Zenix SEC-150和Zenix SEC-300分离效率 (内径为7.8 mm)

色谱柱:   Zenix SEC (7.8x300 mm, 3 μm)
流动相:   150 mM PBS, pH 7.0
流速:      1.0 mL/min
反压:      Zenix SEC-300为1,375 psi, Zenix SEC-150为1,100psi
温度:     室温(~ 23℃)
检测波长: 214 nm
进样量:   10 μL
样品:    1)甲状腺球蛋白 (1.0 mg/L), 670 kD; 2)BSA二聚体, 132 kD; 3) BSA (1.0 mg/L), 66 kD; 4)核糖核A (1.0 mg/L), 13.7 kD; 5) 尿嘧啶 (2.5 μg/mL), 120 D.

表2. Zenix SEC-150和Zenix SEC-300分离效率

峰	蛋白	Zenix 150	Zenix 300
1	甲状腺球蛋白	18050	2460
2	BSA二聚体	2420	5110
3	BSA	5620	13090
4	核糖核酸酶A	17600	22000
5	尿嘧啶	42000	38500

高载样量

载样量是衡量体积排阻色谱柱性能的重要指标之一，下图表明Zenix系列分析色谱柱在BSA上样量高达500 μg的情况下，仍保持着完美的分析峰形。

图3. Zenix SEC-150 色谱柱对BSA载样量的测试图谱

色谱柱:      Zenix SEC-150 (3 μm, 7.8x300 mm)
流动相:      150 mM Sodium phosphate buffer, pH 7.0
流速:         1.0 mL/min
进样量:      10 μL
检测器:      UV 214 nm

图4. Zenix SEC-300 色谱柱对BSA载样量的测试图谱

色谱柱:     Zenix SEC-300 (3 μm, 7.8x300 mm)
流动相:     150 mM Sodium phosphate buffer, pH 7.0
流速:         1.0 mL/min
进样量:     10 μL
检测器:    UV 214 nm

高稳定性

赛分科技独有的表面修饰技术使得硅胶表面的键合密度达到很大化，从而阻止了能够促进键合相脱落的溶剂分子向薄膜内侧的扩散，保证了其在pH 2-8.5范围的稳定使用。Zenix体积排阻柱适用于大多数水性及有机溶剂，包括：醋酸、磷酸、Tris缓冲盐体系、甲醇、乙醇、THF、DMF、DMSO等，同时可耐受高盐溶液，如2.0 M的NaCl。

流动相的兼容性

Zenix SEC固定相能与大多水相缓冲液兼容，如醋酸铵、磷酸盐、Tris等。Zenix SEC固定相能够承受高浓度盐，如2.0 M。同时Zenix SEC柱在有机溶剂中，如甲醇、乙醇、四氢呋喃、2,5-二甲基呋喃、二甲基亚砜等，水和有机溶剂混合相中均能保持稳定。

高蛋白回收率

Zenix SEC固定相为亲水性和中性，蛋白和其他生物分子与固定相之间的非特异性吸附可忽略。可抑制蛋白吸附到硅胶固定相表面的作用，从而能够实现蛋白高的回收率，在分离后能够保持蛋白的活性。酸性和碱性蛋白的代表BSA和溶菌酶的回收率能够高于95%。

Zenix SEC-80


产品名称	粒度	孔径	规格	订货号
Zenix SEC-80	3 μm	80 Å	21.2x300 mm	213080-21230
Zenix SEC-80	3 μm	80 Å	7.8x300 mm	213080-7830
Zenix SEC-80	3 μm	80 Å	7.8x50 (保护柱)	213080-7805
Zenix SEC-80	3 μm	80 Å	4.6x300 mm	213080-4630
Zenix SEC-80	3 μm	80 Å	4.6x50 (保护柱)	213080-4605

Zenix SEC-100


产品名称	粒度	孔径	规格	订货号
Zenix SEC-100	3 μm	100 Å	21.2x300 mm	213100-21230
Zenix SEC-100	3 μm	100 Å	7.8x300 mm	213100-7830
Zenix SEC-100	3 μm	100 Å	7.8x50 (保护柱)	213100-7805
Zenix SEC-100	3 μm	100 Å	4.6x300 mm	213100-4630
Zenix SEC-100	3 μm	100 Å	4.6x50 (保护柱)	213100-4605

Zenix SEC-150


产品名称	粒度	孔径	规格	订货号
Zenix SEC-150	3 μm	150 Å	21.2x300 mm	213150-21230
Zenix SEC-150	3 μm	150 Å	7.8x300 mm	213150-7830
Zenix SEC-150	3 μm	150 Å	7.8x50 (保护柱)	213150-7805
Zenix SEC-150	3 μm	150 Å	4.6x300 mm	213150-4630
Zenix SEC-150	3 μm	150 Å	4.6x50 (保护柱)	213150-4605

Zenix SEC-300


产品名称	粒度	孔径	规格	订货号
Zenix SEC-300	3 μm	300 Å	21.2x300 mm	213300-21230
Zenix SEC-300	3 μm	300 Å	7.8x300 mm	213300-7830
Zenix SEC-300	3 μm	300 Å	7.8x50 (保护柱)	213300-7805
Zenix SEC-300	3 μm	300 Å	4.6x300 mm	213300-4630
Zenix SEC-300	3 μm	300 Å	4.6x50 (保护柱)	213300-4605

Mono GPC 系列酯溶性凝胶色谱柱

概述：

Mono GPC 转为合成高分子的高效分离而设计,以具有极窄粒径和孔径分布的高交亮度聚苯乙烯/二乙烯苯（PS/DVB）颗粒为基质,孔径分部均一,使分析中保留时间与分子量具有准确的线性关系,高交亮度的多孔颗粒具有优异的化学和物理稳定性,因此在更换有机溶剂时可以使分子量校正曲线的形状及色谱柱的柱效几乎保持不变,Mono GPC填料具有大的孔体积,可确保对聚合物分离有着高的分辨率。该填料既可以是单一空间的树脂,也可以是不童空间树脂的混合物。
优异的特性：

均一的粒径和孔径分布

高的孔容量和高的分辨率

可作用流动相的溶剂多

在光散射检测中背景噪音低

应用：

在常规的聚合物分析中样品的分子量可至两百万道尔顿，可在升高温度的条件下进行分析和制备分离。

典型的应用包括：

聚苯乙烯聚烯烃聚丙烯酸脂

聚硅氧烷聚碳酸脂树脂

图1.Mono GPC-300 线性聚合物分子量校正曲线

注：采用高分子聚丙烯测定（5μm.7.8x.300mm）

表1. Mono GPC 色谱柱技术参数表

固定相	Mono GPC——100	Mono GPC——300	Mono GPC——500	Mono GPC——1000	Mono GPC——10MP
材料	PS，DVB	PS，DVB	PS，DVB	PS，DVB	PS，DVB
颗粒大小	5. 10μm	5. 10μm	5. 10μm	5. 10μm	5. 10μm
孔径（A）	-100	-150	-500	-1000	100-1000（多种孔径填料混合）
分子量排阻范围	100-100.000	500-250.000	1.000-750.000	5.000-2500.000	5.000-2.500.000
PH稳定性	1-14	1-14	1-14	1-14	1-14
耐受压力（psi）	-5000	-5000	-5000	-5000	-5000
使用温度（℃℃℃℃ ）	-145	-145	-145	-145	-145
适用流动相	几乎所有有机溶剂（如：THF ， DMAC , DMF, TCB , NMP , HPIP等）

订购信息

Mono GPC-100

产品名称	粒度（μm）	孔径（A）	规格	订货号
Mono GPC-100	5 10	100	7.8X300mm	130100-7830 240100-7830
mono GPC-100	5 10	100	7.850（Guand）	230100-7805 240100-7805
mono GPC-100	5 10	100	4.6x300mm	230100-4630 240100-4630
mono GPC-100	5 10	100	4.6x50（Guard）	230100-4605 240100-4605
mono GPC-300	5 10	300	7.8x300mm	230300-7830 250300-7850
mono GPC-300	5 10	300	7.8x50（Guard）	230300-7830 250300-7850
mono GPC-300	5 10	300	4.6x300mm	230300-4630 250300-4630
mono GPC-300	5 10	300	4.6x50,（Guard）	230300-4630 250300-4630
mono GPC-500	5 10	500	7.8x300mm	230500-7830 250500-7830
mono GPC-500	5 10	500	7.8x50（Guard）	250500-7805 250500-7805
mono GPC-500	5 10	500	4.6x300mm	250500-4630 250500-4630
mono GPC-500	5 10	500	4.6x50（Guard）	250500-4605 250500-4605
mono GPC-10MP	5 10	100-1000	7.8x300mm	231135-7830 251135-7830
mono GPC-10MP	5 10	100-1000	7.8x50（Guard）	251135-7805 251135-7805
mono GPC-10MP	5 10	100-1000	4.6x300mm	251135-4630 251135-4630
mono GPC-10MP	5 10	100-1000	4.6x50（Guard）	251135-4605 251135-4605

注：以上为常规订货信息：其它规格或特殊定制产品：来电咨询

Nanofilm 系列高分辨率纳米凝胶色谱柱

凝胶色谱柱产品描述：

凝胶色谱柱：Nanofilm

Nanofilm体积排阻（SEC）固定相是以高纯度具有良好机械稳定性的硅胶为基质，表面化学键合有一层均一、亲水、纳米厚度的中性聚合物薄膜。该固定相的一个特点是可使用低盐浓度，或含有机溶剂的缓冲液作为流动相进行生物样品的分离，并具有高的分辨率和样品回收率。该色谱填料为窄粒径分布的球形硅胶颗粒。孔径规格有150、250、450和950Å。

不同规格Nanfilm SEC固定相的特征参数

固定相	Nanofilm SEC-150	Nanofilm SEC-250	Nanofilm SEC-500	Nanofilm SEC-1000
材料	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜	纳米亲水键合薄膜
粒径	5、10μm	5、10μm	5、10μm	5、10μm
孔径(Å)	~ 150	~ 250	~ 500	~ 1,000
蛋白分子量范围	200 - 750,000	1,500 - 1,250,000	15,000 - 2,500,000	50,000 - 5,000,000
pH稳定性	2 - 8.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	2 - 8.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	2 - 8.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)	2 - 8.5 (pH 9.0 下可以短暂使用)
反压(psi, 以4.6mm I.D.×300mm计)	~ 700	~ 700	~ 750	~ 750
耐受压力(psi)	~ 3,500	~3,500	~ 3,000	~ 3,000
盐浓度范围	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M	20mM - 2.0M
耐受温度(°C)	~ 80	~ 80	~ 80	~ 80

Nanofilm 系列高分辨率纳米凝胶色谱柱产品特点：

● 高的分辨率和分离效率
● 在高浓度盐溶液中非常稳定
● 高的重复性
● 可在低浓度盐溶液中进行蛋白的分离
● 高的蛋白回收率，并可保持其生物活性
● pH适用范围2-9

高效分离

对于生物分离而言，生物分子与填料之间的非特异性相互作用往往会导致低的分离效率，如色谱峰拖尾以及低的回收率等。Nanofilm SEC填料所采用的独特的表面化学技术可以在硅胶表面共价键合一层均匀的聚合物链。这种固定相具有中性和亲水的性质，因此可以大限度消除填料基质与生物分子，其中尤其是与蛋白之间的非特异性相互作用。这种经过特别设计的涂层可以使Nanofilm SEC柱获得高的分辨率和分离效率。例如，以尿嘧啶作为测试物可以获得高达每米90,000的理论塔板数（见表1）。

表1 Nanofilm SEC柱的柱效，以尿嘧啶为待测物（0.1M磷酸盐缓冲液，pH7.0）

Nanofilm SEC-150	>90,000 塔板/米
Nanofilm SEC-250	>90,000 塔板/米
Nanofilm SEC-500	>85,000 塔板/米
Nanofilm SEC-1000	>85,000 塔板/米

标准蛋白分离

Nanofilm SEC柱高效分离的例子见图1。四种蛋白质，甲状腺球蛋白、BSA二聚体、BSA和溶菌酶，以及一种多肽在Nanofilm SEC柱上得到了满意的分离。以溶菌酶计得到的理论塔板数高至30,000/m，因此溶菌酶中的一种杂质都可以得到很好的分离，而这种分离效果通常只有在高效毛细管电泳中才看得到。SEC柱的标准测试样品通常为Biorad 标准蛋白（甲状腺球蛋白、免疫球蛋白G 、卵清蛋白、肌球素）。这些蛋白质的pI均小于7.5，因此在pH=7.0时不会带有明显的正电荷。但是高度带正电荷的蛋白质，如溶菌酶（pI 11.0）、细胞色素（pI 10.6）、抑肽酶（pI 11.0）却容易与填料表面的残余硅羟基发生强静电相互作用而非常难被洗脱。Nanofilm SEC柱不存在这个问题。而且，成都摩尔公司建立了自己的蛋白测试标准样品，其中就包括了对生物分离性能非常敏感的溶菌酶。

图1 在4.6mm I.D.×250mm Nanofilm SEC-150色谱柱上分离4种蛋白和一个多肽。

Nanofilm SEC-150柱上分离4种蛋白和一个多肽。

BSA与BSA二聚体的分离

从图2可以看到，Nanofilm SEC-250色谱柱（4.6mm I.D.×300mm），可以获得牛血清白蛋白（BSA）和BSA双聚体的分离，其中流动相为150mM的磷酸盐缓冲液（pH 7.0）。

Nanofilm SEC-250柱（4.6mm I.D.×300mm）

甲状腺球蛋白中聚合体的分离

甲状腺球蛋白是一个大分子量蛋白（MW 670,000）。商品化的甲状腺球蛋白含有聚合体杂质，可能是双聚体或四聚体。从图3可以看到，Nanofilm SEC-500可以对甲状腺球蛋白和甲状腺球蛋白聚合体实现基线分离。

图3 用Nanofilm SEC-500色谱柱（5μm, 4.6mm I.D.×300mm）从甲状腺球蛋白中分离出聚合体。

色谱条件:

流动相，150mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0；流速，0.35mL/min；检测波长，UV 214nm；温度，室温（23°C）；进样体积，5μL。蛋白样品：（1）聚合体；（2）甲状腺球蛋白（1.0mg/mL），670kD。

孔结构对分离的影响

SEC填料孔径的大小在蛋白分离中起到至关重要的作用。对于在某一特定分子量范围内分布的蛋白样品而言，Nanofilm SEC固定相规格的选择需要基于填料的排除极限和线性分子量范围这两个参数。

Nanofilm填料	蛋白的分子量排除极限
SEC-150	750,000
SEC-250	1,250,000
SEC-500	2,500,000
SEC-1000	5,000,000

图4 Nanofilm SEC-150、Nanofilm SEC-250和Nanofilm SEC-500色谱柱（5μm, 7.8mm I.D.×300mm）分离效果的比较。

色谱条件：

流动相，150mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0；
流速，0.25mL/min；
检测波长： UV 280nm；
温度，室温（23°C）；
进样体积，5μL。
样品：（1）甲状腺球蛋白（1.0mg/mL）， 670kD；（2）BSA （1.0mg/mL），66kD；（3）核糖核酸酶A（1.0mg/mL），13.7kD；（4）尿嘧啶（2.5mg/mL），120 D。

Nanofilm SEC-150

图4为具有不同孔径的Nanofilm SEC色谱柱对分子量在120-670,000之间分布的三种蛋白的分离，从中可以看到Nanofilm SEC填料孔径的不同对分离的影响。

高的蛋白回收率及蛋白活性的保持

Nanofilm SEC填料是在硅胶表面大限度地共价键合一层亲水的中性薄膜。蛋白或其它生物分子与这种填料的相互作用非常小。因此，蛋白在硅胶表面的吸附将会被抑制，这就保证了高的回收率，并可使蛋白在分离之后依然有着高的生物活性。表2是实验测得的酸性蛋白BSA和碱性蛋白溶菌酶的回收率数据。

表2 蛋白在Nanofilm SEC色谱柱上的回收率（色谱柱规格4.6mm I.D.×250mm，流动相为0.15M磷酸盐缓冲液，pH 7.0）

固定相	蛋白回收率%
Nanofilm SEC-150	BSA	>95%
Nanofilm SEC-150	溶菌酶	>90%
Nanofilm SEC-250	BSA	>95%
Nanofilm SEC-250	溶菌酶	>90%
Nanofilm SEC-500	BSA	>95%
Nanofilm SEC-500	溶菌酶	>95%
Nanofilm SEC-1000	BSA	>95%
Nanofilm SEC-1000	溶菌酶	>95%

Nanofilm SEC固定相的高稳定性

Nanofilm SEC固定相具有致密的涂层键合密度，因此可阻止任意分子破坏硅胶与固定相之间的键合，从而保证填料具有高的稳定性。Nanofilm SEC固定相可用于多种缓冲液中，如醋酸铵、磷酸盐、Tris等。当用150和100mM的磷酸缓冲液（pH7.0）作为流动相时，在3个月或进样1000次后Nanofilm SEC柱的性能仅会发生轻微的改变，保留时间的偏差在5%以内。图5是Nanofilm SEC-150在1、5和10天，每天运行10小时得到的结果。从图中可以看到流出曲线基本重合。图6是两周内蛋白和一个小分子在500倍柱体积内保留时间的变化情况。从图中可以看到保留时间变化的差异非常小。 Nanofilm SEC固定相可在高盐浓度，如1.0M下使用。另外，Nanofilm SEC柱在有机溶剂如甲醇、乙醇、THF、DMF、DMSO等中，以及其与水的混和溶液中也相当稳定。 Nanofilm SEC柱在pH 2-8.5范围内稳定。另外，在短时间内也可以耐受高的pH，如pH 8.5-10。 Nanofilm SEC柱在温度耐受方面表现突出。高工作温度可达到80°C。

图5 Nanofilm SEC固定相稳定性实验结果

Nanofilm SEC固定相稳定性

色谱条件：

色谱柱，Nanofilm SEC-150(5μm, 4.6mm I.D.×300mm)；流动相，150mM和100mM磷酸盐缓冲液, pH 7.0；流速，0.35mL/min；温度，室温；进样体积，10μL。样品：1. 甲状腺球蛋白(1.0mg/mL)；2. BSA (1.0mg/mL)；3. 核糖核酸酶A(1.0mg/mL)；4. 尿嘧啶(50mg/mL)。每天运行10小时。

图6 三种蛋白和尿嘧啶在500倍柱体积内反复进样得到的保留时间的变化情况。测试条件同上图。

三种蛋白和尿嘧啶在500倍柱体积内反复进样得到的保留时间的变化情况

蛋白分子量的校正

对于SEC而言，填料孔径的大小决定了所能分离的分子量范围，而孔体积则决定了分离容量。Nanofilm填料拥有4种孔径规格，可以覆盖一个宽范围分子量分布的生物大分子。图7是Nanofilm SEC-150、Nanofilm SEC-250和Nanofilm SEC-500的蛋白分子量校正曲线。

图7 Nanofilm SEC柱的蛋白分子量校正曲线图。色谱条件：色谱柱4.6mm I.D.′300mm, 填料粒径为5μm；流动相为150mM磷酸盐缓冲液, pH 7.0；流速为0.25mL/min；检测波长为214nm；进样体积为5μL。样品为: 1. 甲状腺球状蛋白(670kD), 2. IgG(150kD), 3. BSA双聚体(132kD), 4. BSA (66kD), 5. 卵清蛋白(44kD), 6. 肌红蛋白(17.6kD), 7. 溶菌酶(14.3kD), 8. B12 (1.35kD), 9. 尿嘧啶(120D)。

蛋白分子量的校正

另一种广泛使用的表征SEC固定相的方法是以蛋白的分子量对扩散系数（K_d）作图。K_d按下式定义： K_d = (Ve-Vo)/(V_T-Vo) 其中Ve、VT和Vo分别是样品洗脱体积，色谱柱的总体积和柱的死体积。蛋白分子量和Kd的线性区间经常会被作为SEC固定相选择的参考。如图8所示，Nanofilm SEC-150在一个宽的分子量范围内分子量和K_d之间有着良好的线性关系。

SEC固定相

图8 Nanofilm SEC-150的蛋白分子量校正曲线。色谱柱：Nanofilm SEC-150 (4.6mm I.D.×150mm, 5μm)；流动相：100mM磷酸缓冲液，pH 7.0；流速：0.25mL/min；检测波长：UV 214nm；温度：室温（23°C）；进样体积，5μL。样品：（1）甲状腺球蛋白（670KD）；（2） IgG（150KD）；（3）BSA双聚体（132KD）；（4 ）BSA（66KD）；（5）卵清蛋白（44KD）；（6）a-胰凝乳蛋白酶（25KD）；（7）肌红蛋白（17.6kD）；（8）溶菌酶（14.3kD）；（9）多肽样品（1.5kD）；（10）尿嘧啶（120D）。

低盐浓度下蛋白的分离

对于带正电荷蛋白的分离，往往需要用高盐浓度来减弱硅胶基质与蛋白之间的强静电相互作用。比如细胞色素C是一种富含正电荷的蛋白质（pI=9.6），因此很难在低盐浓度（比如50mM磷酸盐缓冲液， pH 7.0）下被洗脱出来。使用高盐浓度洗脱会限制SEC柱在蛋白分离中的应用。赛分公司所开发的Nanofilm SEC柱可以有效地分离带正电荷的蛋白质。如图9所示，采用Nanofilm SEC-500柱，细胞色素C可以在50mM磷酸盐缓冲液（pH 7.0）中得到很好的分离，而这种分离效果是其它硅胶基质SEC柱所无法实现的。Nanofilm SEC柱的出现为SEC开拓了许多新的应用领域，例如分离对盐敏感的生物分子，蛋白相互作用的研究，以及LC/MS检测等。

图9 细胞色素C在不同磷酸盐缓冲液（pH 7.0）中的流出曲线。

色谱柱：Nanofilm SEC-250柱(5μm, 4.6mm I.D.×300mm)；
流速：0.35mL/min；
检测波长：UV 214nm；
温度：室温（23°C）；
进样体积，5μL；
样品浓度，1.0mg/mL。

SRT SEC和Nanofilm SEC的比较

与Nanofilm SEC相比，SRT SEC具有更高的分离容量和分辨率，可供选择的孔径规格也要比前者多。但是，Nanofilm SEC在一些应用，如使用低盐浓度或含可挥发性盐的有机溶剂作为流动相进行富含正电荷生物分子的分离，多维色谱分离，以及LC/MS等中表现得更为稳定，而这是传统SEC固定相所无法实现的。另外，SRT和Nanofilm SEC固定相也具有不同的选择性。SRT和Nanofilm SEC固定相可以组合起来使用，从而可为生物分子，水溶性聚合物，病毒和细菌，以及纳米颗粒等的分离提供一个完整的分离方案。

发布于 2018-01-31 10:37:23

李丽

这个楼主你怎么不发凝胶色谱柱价格呢？我想知道价格

发布于 2018-02-05 17:10:13

张鑫

凝胶渗透色谱柱？凝胶柱

发布于 2018-02-05 17:08:32