液相色谱_电喷雾串联质谱同时检测尿液和胃液中12种有毒生物碱

摘要建立了高效液相色谱-电喷雾串联质谱同时检测尿液和胃液中12 种有毒生物碱的方法。优化了提
取条件及色谱-质谱条件，并考察了基质效应的影响，探讨了质谱碎裂机理。尿液和预先调节至中性的胃液经硼砂-NaOH 缓冲液( pH 9． 6) 碱化，乙酸乙酯液液萃取，采用电喷雾电离( ESI+ ) 、多反应监测( MRM) 方式，可同时对黄华碱、倒千里光碱、山莨菪碱、钩吻碱、芦竹碱、哈尔碱、吐根碱、血根碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、雷公藤吉碱和雷公藤次碱12 种有毒生物碱进行定性和定量分析。在优化的条件下， 12 种成分分别在0． 5 ～ 200 !g /L、1 ～ 200 !g /L 和5 ～ 200 !g /L 范围内线性关系良好，尿液中除黄华碱和山莨菪碱外，各生物碱的回收率为61． 9% ～ 119． 1%，胃液中各生物碱回收率为61． 0% ～ 110． 2%，精密度RSD＜15%，检出限( LOD) 为0． 1 ～ 0． 5
!g /L，定量限( LOQ) 为0． 5 ～ 5． 0 !g /L，对回收率不高的生物碱可通过空白基质配制标样校正，满足定量分析的要求。本方法操作简便、快捷、灵敏度高，适用于中毒患者尿液和胃液中有毒生物碱成分的检测。

    生物碱是一类含氮有机化合物，广泛存在于自然界中，是许多中草药的活性成分，但某些生物碱具有很强毒性，常因误食、误服、用药过量甚至蓄意投毒而导致生物碱中毒，如2001 年邓文龙［1］统计超过800 例因服用或误食雷公藤而导致中毒或死亡，梁爱华等［2］描述了吡咯里西定类生物碱毒性及中毒事件，而倒千里光碱是其中毒性较大的生物碱。含有毒生物碱的植物分布广，如上面提到的卫矛科的雷公藤含有雷公藤吉碱、雷公藤次碱等，菊科千里光属的千里光含有千里光碱、倒千里光碱，罂粟科植物白屈菜含有血根碱，葫蔓藤科的钩吻含有钩吻碱，豆科的披针叶黄华、甘肃棘豆含有黄华碱，芸香科植物吴茱萸、石虎含吴茱萸碱、吴茱萸次碱，茜草科的吐根含吐根碱，蒺藜科的骆驼蓬有哈尔碱等。当发生有毒生物碱中毒时，因毒性大、会在生物体内代谢等原因，生物碱在体液内的含量低，检测困难。
    目前，生物体液中有毒生物碱同时检测的方法有气相色谱-质谱联用法( GC-MS) ［3］、液相色谱-质谱联用法( LC-MS、LC-MS /MS) ［4 ～ 13］。由于生物碱一般不易挥发，能用GC-MS 进行分析检测的生物碱较少，现在更倾向于采用LC-MS 和LC-MS /MS。Beyer 等［4］建立了血浆中常见的9 种有毒生物碱( 包括一个代谢物) 的LC-APCI-MS 和LC-ESI-MS /MS 方法; 文献［5 ～ 9］分别研究了尿液和血液中多种有毒生物碱的检测方法; 也有同时检测体液中同一植物来源的生物碱的方法［11 ～ 13］的报道，但是这些检测方法所包含的有毒生物碱种类有限。现有检测方法中，除山莨菪碱［6，9， 10］、钩吻碱［9］和吴茱萸碱［10］外，黄华碱、倒千里光碱、芦竹碱、哈尔碱、吐根碱、血根碱、吴茱萸次碱、雷公藤吉碱、雷公藤次碱均未见报道。在实际检测中，除血液外，胃液和尿液也是经常送检的样品。本研究采用乙酸乙酯液液萃取尿液和胃液中上述12 种有毒生物碱、用LC-MS /MS 在电喷雾电离( ESI+ ) 、多反应监测( MRM) 模式定性与定量分析，建立了快速检测12 种有毒生物碱的方法，检出限为0． 1 ～ 0． 5 !g /L，满足痕量分析的要求，为有毒生物碱中毒事故检测、法医毒物分析提供方法。