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红车轴草提取物定量测定方法的优化

谭浩轩 | -> | 1041| 0| 0.919089MB |红车轴草,异黄酮,鹰嘴豆芽素A,染料木素,刺芒柄花素,大豆苷元,HPLC

谭浩轩 谭浩轩 | 文档量 |浏览量39896

摘要:目的优化红车轴草提取物的定量测定方法,以客观有效地评价提取物的质量。方法以鹰嘴豆芽素 A、染料木素、刺芒柄花素和大豆苷元4 种异黄酮苷元作为定量测定的指标成分,采用HPLC 法分别测定提取物酸水解前后异黄酮的量。结果通过系统的研究与优化,确定的色谱条件为:Capcell pak C18 柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),柱温30 ℃,检测波长254 nm,体积流量1.0 mL/min,以乙腈(含0.05% TFA)-水(含0.05%TFA)梯度洗脱;酸水解条件为:提取物以1 mol/L盐酸甲醇溶液(每毫克提取物样品加2.0 mL)于85 ℃水浴回流1.5 h,冷却至室温后定容待测。结论本方法为红车轴草提取物提供了一种简便快速、有效可靠的定量测定方法。
    红车轴草 Trifolium pratense L.为豆科多年生草本植物,又名红三叶草、红花苜蓿[1],因植物中含有较为丰富的异黄酮[2],其提取物已被全球广泛应用于各种保健品或饮食增补剂中,用于预防乳腺癌、改善骨质疏松、妇女更年期综合症等[3-8],许多国家因此将其纳入法定标准,美国药典-国家处方集的饮食增补剂分册(Botanical Official Monographs inUSP30-NF25)就收载红车轴草及其提取物的质量标准。我国目前尚未建立红车轴草相关产品的国家标准,但每年对欧美市场出口大量的红车轴草提取物,故外经贸部于2005 年颁布实施了红车轴草提取物的外贸行业绿色标准。
    红车轴草提取物的国内外质量标准,均采用HPLC 进行定量测定,但指标成分及测定方法存在
较大差异:我国外贸行业标准是以刺芒柄花苷(ononin,也称芒柄花苷)、印度黄檀苷(sissotrin)、刺芒柄花素(formoononetin,又称芒柄花素、鸡豆黄素 B、鹰嘴豆芽素B)、鹰嘴豆芽素A(biochaninA,又称鸡豆黄素A、鹰嘴甲素)为指标成分,直接测定提取物中各指标成分的量;美国国家标准则将提取物酸水解,与法定标准提取物对照后,以刺芒柄花素为基准物按不同的换算因子分别折算鹰嘴豆芽素A、染料木素(genistein)、刺芒柄花素、大豆黄素(daidzein,又称大豆苷元、大豆素)的量。
    就化学结构而言,刺芒柄花苷为刺芒柄花素的单糖苷,印度黄檀苷为鹰嘴豆芽素A 的单糖苷,化学结构式见图1 与表1。
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