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关键词：
汾酒,质量,产量
发表时间：
2012-12-19 10:16:15
摘要: 为研究血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme, ACE) 抑制肽体外抑制ACE 活性以期筛选出有降压作用的先导物, 采用Fmoc 固相合成法合成ACE抑制肽, 经反相高效液相色谱法 (RP-HPLC) 分离纯化,采用质谱对其进行鉴定, 并使用RP-HPLC 法直接测定ACE 抑制肽对ACE 的体外抑制活性。合成的6 个八肽经RP-HPLC 纯化后, 质谱分析结果与理论值一致。活性评价结果表明6 号八肽 (抗SARS 肽) 对ACE 的抑制作用最明显, 其IC50 为3.4×10−5 mol·L−1, 由此可见抗SARS 肽 (AVLQSGFR-OH) 是一个具有降压作用的先导物, 具有进一步研究的意义。
血管紧张素转化酶 (angiotensin converting enzyme,ACE) 是一种多功能酶, 它在体内肾素-血管紧张素系统 (RAS) 和激肽释放酶-激肽系统 (KKS) 中对血压的调节起着重要作用。RAS 是调节血压的重要内分泌系统, 其中的肾素能将血管紧张素原水解, 释放出血管紧张素I (AngI), ACE 能水解AngI 羧基末端的二肽His-Leu 生成血管紧张素Ⅱ (AngⅡ), 其是已知最强的收缩血管物质之一, 它可以使血管平滑肌收缩迅速引起升压效应。KKS 是人体内源性降压系统, 激肽释放酶作用于无活性的激肽原生成具有血管舒张功能的激肽, ACE 在KKS 中能使缓激肽失活转变为没有活力的缓释肽, 使KKS 处于抑制状态, 导致血管收缩占优势, 血压升高。RAS 和KKS在血压调节方面是一对相互拮抗的体系, 其平衡对维持正常血压有重要作用。平衡失调是高血压发病的重要因素之一, 而ACE 在RAS 和KKS 中对血压调节起重要作用, 因此抑制ACE 活性对降低血压很重要[1]。
近年来, 高血压在世界范围内成日趋严重的态势, 已经成为生命“第一杀手”, 防治高血压成为全球医务界面临的一项艰巨任务。调查显示高血压患者中大多数使用合成ACE 抑制剂如卡托普利 (catopril)等药物来治疗高血压。这类药物具有作用时间短、停药后血压易反弹等缺点, 且药物吸收排泄速度快, 会引起咳嗽、丧失味觉、肾脏损伤及血管神经性水肿等副作用[2−5]。从天然食物中分离的ACE 抑制肽 (也称降压肽) 虽然降压效果没有合成药物明显, 但其对正常血压无影响、没有毒副作用。ACE 抑制肽是生物活性肽的一种, 一般只包括几个氨基酸残基[6], 可以快速的通过消化黏膜进入血液循环, 起到降压功能。所以, ACE 抑制肽作为一种新的降压药物受到人们的广泛关注。
目前ACE 抑制肽主要通过酶水解食品蛋白来获得[7, 8], 其分离纯化方法比较复杂, 并且天然提取资源有限, 成本昂贵[9, 10]。ACE 抑制肽多为分子量较小的短肽, 从酶解产物中分离得到并进行了序列分析后, 可用肽的固相合成法来大批量生产用以研究其ACE 抑制活性[11]或其他活性[12](抑菌及抗癌活性),这样比直接从酶解产物中分离纯化可能更经济实惠,也可以满足药物生产的需要[13], 这也是近年来的研究趋势。本文采用Fmoc 固相合成法合成了6 个八肽,其序列如表1 所示, 并对其进行了体外抑制ACE 活性研究。其中1～3 号八肽[14]是从昆虫中提取分离出来的天然产物, 研究表明这3 种八肽具有抑制ACE的活性。4 号八肽为血管紧张素AⅡ肽酰胺, 即体内此反应体系的产物, 本文研究其对ACE 活性的影响。6 号八肽AVLQSGFR-OH 是Chou 等[15]在进行严重急性呼吸综合征 (severe acute respiratory syndromes,SARS) 冠状病毒主蛋白酶 (SARS．CoV Mpm) 与配基 (KZ7088 和AVLQSGFR)的对接研究中提出的抗SARS 八肽, 5 号为抗SARS 八肽酰胺AVLQSGFR-NH2。5 号和6 号八肽未见报道其具有抑制ACE 的活性, 但作者发现其序列符合ACE 抑制肽构效关系的原则, 因此推测其应该具有ACE 抑制活性, 所以也将其合成做ACE 抑制活性研究。以5 号和6 号八肽为例, 八肽的固相合成见合成路线1。
近年来, 高血压在世界范围内成日趋严重的态势, 已经成为生命“第一杀手”, 防治高血压成为全球医务界面临的一项艰巨任务。调查显示高血压患者中大多数使用合成ACE 抑制剂如卡托普利 (catopril)等药物来治疗高血压。这类药物具有作用时间短、停药后血压易反弹等缺点, 且药物吸收排泄速度快, 会引起咳嗽、丧失味觉、肾脏损伤及血管神经性水肿等副作用[2−5]。从天然食物中分离的ACE 抑制肽 (也称降压肽) 虽然降压效果没有合成药物明显, 但其对正常血压无影响、没有毒副作用。ACE 抑制肽是生物活性肽的一种, 一般只包括几个氨基酸残基[6], 可以快速的通过消化黏膜进入血液循环, 起到降压功能。所以, ACE 抑制肽作为一种新的降压药物受到人们的广泛关注。
目前ACE 抑制肽主要通过酶水解食品蛋白来获得[7, 8], 其分离纯化方法比较复杂, 并且天然提取资源有限, 成本昂贵[9, 10]。ACE 抑制肽多为分子量较小的短肽, 从酶解产物中分离得到并进行了序列分析后, 可用肽的固相合成法来大批量生产用以研究其ACE 抑制活性[11]或其他活性[12](抑菌及抗癌活性),这样比直接从酶解产物中分离纯化可能更经济实惠,也可以满足药物生产的需要[13], 这也是近年来的研究趋势。本文采用Fmoc 固相合成法合成了6 个八肽,其序列如表1 所示, 并对其进行了体外抑制ACE 活性研究。其中1～3 号八肽[14]是从昆虫中提取分离出来的天然产物, 研究表明这3 种八肽具有抑制ACE的活性。4 号八肽为血管紧张素AⅡ肽酰胺, 即体内此反应体系的产物, 本文研究其对ACE 活性的影响。6 号八肽AVLQSGFR-OH 是Chou 等[15]在进行严重急性呼吸综合征 (severe acute respiratory syndromes,SARS) 冠状病毒主蛋白酶 (SARS．CoV Mpm) 与配基 (KZ7088 和AVLQSGFR)的对接研究中提出的抗SARS 八肽, 5 号为抗SARS 八肽酰胺AVLQSGFR-NH2。5 号和6 号八肽未见报道其具有抑制ACE 的活性, 但作者发现其序列符合ACE 抑制肽构效关系的原则, 因此推测其应该具有ACE 抑制活性, 所以也将其合成做ACE 抑制活性研究。以5 号和6 号八肽为例, 八肽的固相合成见合成路线1。
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