脂肪酶的失活动力学与疏水特性研究

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摘 要: 在不同温度下考察脂肪酶的失活动力学, 并将失活率不同的脂肪酶使用疏水层析色谱进行分析, 查看其保留行为。结果表明, 设定40 e 时的酶活为100%, 则酶活为0~ 100%在疏水层析柱上表现为2. 16 ~ 2. 39m in的保留时间区间。但是在该保留时间区间内, 脂肪酶的热失活引起的结构变化, 在疏水柱上的保留时间并不呈线性变化, 使用Z 值查看脂肪酶与固定相的结合情况, 表明Z 值的变化与脂肪酶失活情况下的结构变化不存在明显的对应关系。
关键词: 脂肪酶; 失活动力学; 疏水层析
    多数的酶都是蛋白质, 蛋白质对于温度非常敏感, 温度过高, 会引起蛋白质的结构发生变化, 作为酶来说, 其活性部位结构的改变会引起酶的失活, 在这一过程中, 往往会伴随着疏水基团的暴露, 其溶解性也会降低。疏水层析(H IC)是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法, 分子表面疏水基团越多, 则在疏水层析柱上该分子的保留时间就越长[ 1]。陈国亮等人的研究发现, 疏水柱中蛋白质保留值的增加是由构象变化而不是由盐析和动力学因素引起的[ 2]。所以, 疏水层析柱上酶的保留时间可以反映出其疏水基团的暴露程度, 进而能够反映其失活程度。本文通过对脂肪酶的失活动力学进行研究, 将其失活行为与其在疏水层析柱中的保留行为相关联, 初步探索两者之间的联系。
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