基于中空纤维液相微萃取的大鼠体内大黄素及其代谢物分析_田杰

摘要: 建立了中空纤维液相微萃取( HFLPME) 耦合高效液相色谱法( HPLC) 用于测定血浆和尿液中大黄素及其代谢物的浓度，比较了中药有效成分大黄素在不同性别大鼠体内的吸收和代谢能力，阐述了大黄素在体内的代谢和转化过程。本实验以聚偏氟乙烯纤维为溶剂载体，正辛醇为萃取溶剂，对血浆和尿液样品进行HFLPME 处理，萃取后挥干有机溶剂，用50 μL 甲醇溶解，进行HPLC 测定。在优化的微萃取条件下，血浆和尿液样品中大黄素及其代谢物标准曲线线性良好( 相关系数( r ) 大于0. 996 0) ; 检出限为0. 1 ～ 3. 0 μg /L; 富集倍数为12. 2 ～ 26. 3; 日内、日间精密度( 以相对标准偏差( RSD) 计) 小于11. 0%; 血浆和尿液中代谢物的平均回收率为97. 9% ～ 103%。HFLPME 操作简单，富集倍数高，能有效去除生物样品中复杂基体的干扰，适用于复杂样品中微量、痕量成分分析物的分析测定。

    蒽醌类化合物主要来源于蓼科植物掌叶大黄根茎，其中大黄素不仅具有泻下、抗菌消炎、抗肿瘤、免疫抑制、保肝、抗纤维化等［1］药理作用; 亦可用于保健和日用化工品中，亦有人把它列为天然色素。但近来研究表明，由于蒽醌类化合物在可见光区具有较高的光敏活性，可以通过光化学作用产生高活性的物质对生物分子或细胞产生一系列的破坏作用［2，3］; 另外，中药大黄中的蒽醌类提取物有肾毒性［4］，同时，药物进入体内起效或毒性部位可能是原形药物，也可能是其代谢产物。因此，建立简单、快速、灵敏地测定生物样品中大黄素及其代谢产物浓度的方法，研究大黄素及其代谢产物在生物体内的作用机制和转化过程，对探讨蒽醌类化合物对生物分子或细胞产生破坏作用及对器官毒性的研究具有重要意义。大黄素及其代谢产物的研究已有报道［5 － 9］。但是，常用的大黄素生物样品前处理方法，大多操作复杂，需经过水解后进行液-液提取等步骤［6，7］。随着检测技术灵敏度的提高和样品预处理浓缩、净化能力的改善，生物样品中微量或痕量的代谢物可能被发现。中空纤维液相微萃取( HFLPME) 技术是由Dasgupta 等［10］和Cantw ell
等［11］在1996 年首先提出的一种新的样品前处理技术。该法操作简单，有机溶剂用量少，富集倍数高，净化能力强，适用于复杂生物样品中微量甚至痕量分析物的测定，已成功地应用于生物样品中中药活性成分及其代谢物分析［12， 13］。但HFLPME 作为生物样品中大黄素及其代谢产物的预处理方法用于研究大黄素在生物体内的转化及代谢机理尚未见报道。本文以大鼠为受试对象，用HFLPME 作为生物样品的前处理技术，结合高效液相色谱法( HPLC) ，对大黄素及其可能代谢产物芦荟大黄素、大黄酸、丹蒽醌、大黄酚和大黄素甲醚的分离、浓缩、净化和鉴定进行了探索，讨论了大黄素在雌、雄性大鼠体内的吸收、分布和代谢能力，研究了大黄素及其代谢物在大鼠体内的转化过程。但大黄素及其代谢物都可通过光化反应产生高活性蒽醌的母体结构，它们在动物体内存留是否对生物分子或细胞产生破坏作用或引起肾毒性还有待于进一步研究。