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关键词：
内标法,食品,防腐剂
发表时间：
2011-07-11 11:26:45
毛细管电动色谱分离手性氨基酸及其在生物样品分析中的应用
庞新蕊 | -> | 1174| 3| 0.221245MB |毛细管电动色谱,激光诱导荧光,氨基酸对映体,β-环糊精,大鼠
摘 要 建立了MEKC 法分离丙氨酸(Ala) 、谷氨酸(Glu) 和天门冬氨酸(Asp) 三对手性氨基酸,并对大鼠正常组和白内障组晶体和血清中D2Ala、L2Ala、D2Glu、L2Glu、D2Asp 和L2Asp 进行定量分析。利用FITC 柱前衍生,以β-环糊精(β2CD) 作为手性添加剂,激光诱导荧光检测(LIF) ,优化电泳条件为:气压进样5 s ,分离温度25 ℃,分离电压为20 kV ,运行缓冲溶液为40 mmol/L 硼砂缓冲溶液(pH 9. 3) ,其中包含50 mmol/L SDS 和13 mmol/Lβ2CD。考察了硼砂缓冲溶液浓度、pH 值、分离电压、β2环糊精浓度对分离的影响。在优化电泳条件下,上述3种氨基酸对映体均得到基线分离,并可对大鼠的晶体和血清进行定量分析。本方法操作简单,检测灵敏度高,可用于药品质量监测以及生物样品的分析。
对映体异构体的分离要求分离技术具有高灵敏度、高选择性和高分辨率。毛细管电动色谱(MEKC)
是手性拆分常用的分离模式之一,只需在背景电解质中添加手性选择剂,构建手性环境,即可进行手性
拆分。环糊精及其衍生物(CDs) 是应用最广泛的手性选择剂[1 ,2 ] 。人体中存在D2氨基酸,其含量一般较L 型低,随着检测技术的不断发展,检测极微量D2氨基酸成为可能。文献[ 3 ]以气相色谱法研究了Asp 消旋化的增长率与年龄的相关性。Fisher 等[4 ]报道了老年前期痴呆患者脑室和腰椎脑脊液中存在游离的D2氨基酸。某些D2氨基酸与疾病的相关性正引起人们的重视。
是手性拆分常用的分离模式之一,只需在背景电解质中添加手性选择剂,构建手性环境,即可进行手性
拆分。环糊精及其衍生物(CDs) 是应用最广泛的手性选择剂[1 ,2 ] 。人体中存在D2氨基酸,其含量一般较L 型低,随着检测技术的不断发展,检测极微量D2氨基酸成为可能。文献[ 3 ]以气相色谱法研究了Asp 消旋化的增长率与年龄的相关性。Fisher 等[4 ]报道了老年前期痴呆患者脑室和腰椎脑脊液中存在游离的D2氨基酸。某些D2氨基酸与疾病的相关性正引起人们的重视。
本实验所研究的丙氨酸、谷氨酸和天门冬氨酸是与生命科学密切相关的手性氨基酸。丙氨酸(Ala) 、谷氨酸(Glu) 和天门冬氨酸(Asp) 是分子量较小且均不含苯环的氨基酸,因而手性拆分难度较大。 本实验利用荧光素异硫氰酸酯(FITC) 进行柱前衍生化的方法,采用MEKC 分离模式,以十二烷基硫酸钠(SDS) 为准固定相,以β-环糊精(β-CD) 作为手性选择添加剂,拆分D、L2Ala 、D、L2Glu 和D、L2Asp ,并以高灵敏度的激光诱导荧光(LIF) 检测器进行检测。本方法也可用于正常组和白内障组大鼠晶体、血清中3 种氨基酸D、L 含量的分析,为临床检验和深入研究发病机理提供重要的理论依据。
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