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关键词：
液相色谱2串联质谱,原乳,β-内酰胺酶
发表时间：
2011-07-29 11:31:00
摘 要 建立了原乳中活性β2内酰胺酶拮抗剂的快速高分离液相色谱2串联质谱(RRLC2MS/MS)检测方法。
利用活性β2内酰胺酶能够酶解青霉素族药物的特性,在原乳中加入适量氨苄青霉素,酶解1 h后,检测原乳中氨苄青霉素酶解率,定性检测活性目标物。试样中氨苄青霉素经乙腈溶液提取, HLB固相萃取柱净化和浓缩后, RRLC2MS/MS多反应监测模式定性与定量分析。本方法对活性β2内酰胺酶检出限为4 U /mL; 对原乳中添加1 mg/kg水平氨苄青霉素的加标回收率为92. 3% ～95. 5%; 相对标准偏差RSD≤10% ( n = 6) 。本方法的定性结果与生物杯碟法完全一致。
利用活性β2内酰胺酶能够酶解青霉素族药物的特性,在原乳中加入适量氨苄青霉素,酶解1 h后,检测原乳中氨苄青霉素酶解率,定性检测活性目标物。试样中氨苄青霉素经乙腈溶液提取, HLB固相萃取柱净化和浓缩后, RRLC2MS/MS多反应监测模式定性与定量分析。本方法对活性β2内酰胺酶检出限为4 U /mL; 对原乳中添加1 mg/kg水平氨苄青霉素的加标回收率为92. 3% ～95. 5%; 相对标准偏差RSD≤10% ( n = 6) 。本方法的定性结果与生物杯碟法完全一致。
牛奶中残存抗生素药物问题受到普遍关注。各国政府对超过一定限量抗生素的原料乳实施标准控
制[ 1 ] 。但为谋求私利,仍存在使用生物制剂(即β2内酰胺酶)降解牛乳中残留的抗生素,生产人造“无抗奶”的违法行为。β2内酰胺酶使细菌通过水解内酰胺环而抵抗抗生素的攻击,使人体产生耐药性[ 2 ] 。
目前,β2内酰胺酶的检测方法主要有微生物杯碟法、快速试剂盒法[ 3, 4 ] 、液相色谱法和双流向酶联免疫法[ 5 ] 。杯碟法仅适用于舒巴坦敏感的活性β2内酰胺酶的定性判定,且检测时间较长,需培养20 h左右,满足企业对原乳收购的时限性要求;快速试剂盒法和双流向酶联免疫法检测速度快、操作简便、灵敏度高,双流向酶联免疫法检出限为0. 0005和0. 001 IU /mL[ 5 ] ,由于易出现“假阳性”情况;液相色谱法检测抗生素灵敏度低、定性不准确。本研究采用快速高分离液相色谱2质谱/质谱(RRLC2MS/MS)法测定原乳中活性β2内酰胺酶,具有操作时间短、灵敏度高、准确的优点,可以作为开展仲裁检验的依据。
制[ 1 ] 。但为谋求私利,仍存在使用生物制剂(即β2内酰胺酶)降解牛乳中残留的抗生素,生产人造“无抗奶”的违法行为。β2内酰胺酶使细菌通过水解内酰胺环而抵抗抗生素的攻击,使人体产生耐药性[ 2 ] 。
目前,β2内酰胺酶的检测方法主要有微生物杯碟法、快速试剂盒法[ 3, 4 ] 、液相色谱法和双流向酶联免疫法[ 5 ] 。杯碟法仅适用于舒巴坦敏感的活性β2内酰胺酶的定性判定,且检测时间较长,需培养20 h左右,满足企业对原乳收购的时限性要求;快速试剂盒法和双流向酶联免疫法检测速度快、操作简便、灵敏度高,双流向酶联免疫法检出限为0. 0005和0. 001 IU /mL[ 5 ] ,由于易出现“假阳性”情况;液相色谱法检测抗生素灵敏度低、定性不准确。本研究采用快速高分离液相色谱2质谱/质谱(RRLC2MS/MS)法测定原乳中活性β2内酰胺酶,具有操作时间短、灵敏度高、准确的优点,可以作为开展仲裁检验的依据。
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