基于愈创木酚荧光减量准确测定过氧化物酶活性的新方法_赵炀

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    过氧化物酶(POD, EC 1.11.1.7)是一种广泛存在于植物和动物体内的酶,被应用在临床检验LU
环境监测}z}、有机合成[3]和食品分析[#]等领域,大多数生化试剂盒都含有POD,其最重要的指标就是酶
活性。因此,POD活性的准确定量尤为重要。
    POD能催化酚类或胺类化合物与Hz Oz的反应,常见的显色试剂有邻苯二胺[5]、季胺}6} ,2}2联氮-
二(( 3 -Z,基洋并AAA"} }}酸)二铰盐00、邻苯三酚[[A]愈创木酚(GA} C97以及胺和酚类的祸合物[D.iol;这
些反应的产物通过比色法进行检测,但最常用的是低毒性、廉价的GAo
    研究认为,Hz Oz /POD /GA体系的反应产物是愈创木酚四聚体((4}A) }9',但新的研究发现是愈创木
酚二聚体((2}A) W-}sl。文献[[14」也验证了此结果,并发现该产物不稳定,会很快分解成其它物质,而
且通过它的吸收去定量POD活性,重现性也较差。此外,由于该产物不稳定、难提纯,所以只能间接
地[[IS]通过GA浓度求得反应体系中2 }A的摩尔吸光系数,但这又会由于表观摩尔吸光系数差异导致
测定的POD活性结果产生较大的误差。由于发现Hz Oz /POD /GA体系中的GA还具有稳定的荧光特
性[Dal,所以为了解决上述问题,基于GA荧光减量,提出了一种准确测定POD活性的方法。
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