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关键词：
电解水;制氢;酸性离子液体;催化活性;活化能
发表时间：
2017-02-07 16:50:18
膀胱癌分子标志物基质金属蛋白酶1的可溶性表达和尿液中的活性分析_晋学飞
SDY | -> | 556| 0| 0.565051MB |膀肤癌生物标志物;基质金属蛋白酶;分子探针筛选;明胶酶谱
目前，由膀肌癌引起的男性致死率处于上升趋势。尽管对膀肌癌的诊断和治疗技术己有了很大提
高，但膀肌癌患者的生存率仍然不佳，迫切需要针对膀肌癌术后复发的诊断技术[Cil。寻找新型膀肌癌
标志物，开发非侵入性、高敏感性和特异性、操作简便、费用低廉的检测技术，将提高膀肌癌的早期诊断
水平，达到及时治疗的目的[Cz, 37
基质金属蛋白酶(MMP)也被称为间质胶原酶和成纤维细胞胶原酶，同肿瘤的发生和发展过程密切
相关，在胰腺癌、前列腺癌、大肠癌和乳腺癌中的表达都有升高[C4,5]。有研究表明:在膀肌癌患者尿液
中，MMPl可以作为新型生物标志物，用于预测患者是否会发展为晚期或者高级膀肌癌[[6, 7]。目前，临床
主要使用酶联免疫吸附分析法(ELISA)对尿液样本中的MMPl进行检测，但该方法耗时、尿样制备复
杂，容易导致蛋白降解以及蛋白酶失活。因此，在膀肌癌诊断过程中迫切需要针对MMPl检测的简单、
灵敏、快速的检测技术。
对基质金属蛋白酶的体外和体内检测方法主要有小分子荧光探针、免疫印迹分析和ELISA
等Cs _ i of，但是免疫印迹方法成本较高，需要靶蛋白特异性抗体、内参抗体以及二抗，检测费时费力，且一
次检测的通量有限。Wigner等o}」利用小分子荧光探针快速检测了尿液中MMP9和MMP13的水平。该
方法将MMPs的活性同荧光检测技术巧妙结合，具有高敏感性、快速、方便等特点，适合不同生物样本的
分析，特别适合MMPs的高通量检测。目前，尚没有适用于MMPl的小分子探针检测方法。Kleiner
等o z}建立了一种基于非还原SDS}AGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，即明胶酶谱法，该方
法成本低、简单，适合血浆、组织细胞蛋白提取物或细胞培养上清液等多种生物样本的分析，灵敏度与
小分子荧光探针法相当[00o Roy等Dal将明胶酶谱进一步运用到尿液检测中，并建立了一个基于不同尿
液中MMP9活性指纹图谱进行分类的肿瘤分析鉴定方法。
重组蛋白表达是小分子荧光探针筛选的基础，获得天然构象的重组蛋白一直是探针筛选过程的重
点与难点，利用明胶酶谱法可以对重组蛋白与内源蛋白进行评估，以改进和加快分子探针的筛选进程。
可溶性重组蛋白较包涵体复性蛋白更接近其天然构象，而MMPl蛋白在大肠杆菌中重组表达很容易形
高，但膀肌癌患者的生存率仍然不佳，迫切需要针对膀肌癌术后复发的诊断技术[Cil。寻找新型膀肌癌
标志物，开发非侵入性、高敏感性和特异性、操作简便、费用低廉的检测技术，将提高膀肌癌的早期诊断
水平，达到及时治疗的目的[Cz, 37
基质金属蛋白酶(MMP)也被称为间质胶原酶和成纤维细胞胶原酶，同肿瘤的发生和发展过程密切
相关，在胰腺癌、前列腺癌、大肠癌和乳腺癌中的表达都有升高[C4,5]。有研究表明:在膀肌癌患者尿液
中，MMPl可以作为新型生物标志物，用于预测患者是否会发展为晚期或者高级膀肌癌[[6, 7]。目前，临床
主要使用酶联免疫吸附分析法(ELISA)对尿液样本中的MMPl进行检测，但该方法耗时、尿样制备复
杂，容易导致蛋白降解以及蛋白酶失活。因此，在膀肌癌诊断过程中迫切需要针对MMPl检测的简单、
灵敏、快速的检测技术。
对基质金属蛋白酶的体外和体内检测方法主要有小分子荧光探针、免疫印迹分析和ELISA
等Cs _ i of，但是免疫印迹方法成本较高，需要靶蛋白特异性抗体、内参抗体以及二抗，检测费时费力，且一
次检测的通量有限。Wigner等o}」利用小分子荧光探针快速检测了尿液中MMP9和MMP13的水平。该
方法将MMPs的活性同荧光检测技术巧妙结合，具有高敏感性、快速、方便等特点，适合不同生物样本的
分析，特别适合MMPs的高通量检测。目前，尚没有适用于MMPl的小分子探针检测方法。Kleiner
等o z}建立了一种基于非还原SDS}AGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，即明胶酶谱法，该方
法成本低、简单，适合血浆、组织细胞蛋白提取物或细胞培养上清液等多种生物样本的分析，灵敏度与
小分子荧光探针法相当[00o Roy等Dal将明胶酶谱进一步运用到尿液检测中，并建立了一个基于不同尿
液中MMP9活性指纹图谱进行分类的肿瘤分析鉴定方法。
重组蛋白表达是小分子荧光探针筛选的基础，获得天然构象的重组蛋白一直是探针筛选过程的重
点与难点，利用明胶酶谱法可以对重组蛋白与内源蛋白进行评估，以改进和加快分子探针的筛选进程。
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