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同时适用ELISA和GC_MS快速测定猪肉中盐酸克伦特罗的前处理方法研究

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食品分析 食品分析 | 文档量 |浏览量253770

摘 要:建立同时适用于ELISA 和GC-MS 方法快速测定猪肉中盐酸克伦特罗残留量的前处理方法。猪肉样品在碱化的条件下用乙酸乙酯提取,再用稀盐酸萃取去除脂肪,调pH 值后再经乙酸乙酯反萃取,乙酸乙酯反萃取液均分成两份用氮气吹干,一份加水用于ELISA 检测,另一份经双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,采用选择离子模式(m/z86、212、262、277)进行测定,外标法定量,GC-MS 检出限为0.30μg/kg。在加标浓度为1.0、2.0、5.0μg/kg 时,加标回收率为72.1%~105.6% (ELISA)和79.1%~95.7% (GC-MS),批间相对标准偏差(RSD)为12.5%~16.8% (ELISA)和4.6%~6.9% (GC-MS)。衍生物的峰面积与样品浓度在0. 005~1.000mg/L 范围内呈良好的线性关系,线性回归系数大于0.9 99。
关键词:猪肉;酶联免疫分析;气相色谱- 质谱法;盐酸克伦特罗;残留
    克伦特罗(clenbuterol) 又称克喘素,俗称“瘦肉精”,是人工合成的β- 肾上腺素能受体兴奋剂之一,一般用其盐酸盐即α- (叔丁氨基)甲基-4- 氨基-3,5- 二氯苯甲醇盐酸盐。当它高剂量添加在饲料中,可导致动物体内的脂肪分解代谢增强,蛋白质合成增加,显著提高酮体的瘦肉率[1]。由于盐酸克伦特罗易在动物组织中形成残留,并易导致食物中毒,所以目前我国已禁止将其作为生长促进剂使用。但由于受经济利益的驱使,目前仍被少数不法分子非法使用,因此,检测动物组织中的盐酸克伦特罗残留具有十分重要的意义。
    针对动物组织和尿液中盐酸克伦特罗的检测方法主要有酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)[2-3]、气相色谱- 质谱法( GC-MS)[4-6]、高效液相色谱法(HPLC) [ 7 ]及高效液相色谱- 质谱法[ 8 ]等,其中ELISA 方法常用于样品的筛选,而GC-MS 法具有灵敏度高、假阳性率低的特点,常用作经筛选后阳性样品的确证。目前,已报道的方法中先进行ELISA 再进行GCMS确证的方法主要集中在动物尿液的分析[9-10],尚未见同一前处理方法同时应用在组织样品筛选和确证方面的报道。
    由于组织样品筛选和确证方法前处理的不同,在实际样品检测中造成了样品检测时间长、检测经费高等问题,于是有必要开发同时适用于ELISA 和GC-MS 方法的前处理方法。本实验针对盐酸克伦特罗的化学特性,拟建立有机溶剂提取- 稀盐酸反萃取- 有机溶剂再反萃取相结合的方法,以期适用于ELISA 和GC-MS 前处理。
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