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关键词：
MUCT工艺,低C/N,ASM2d,动力学参数,化学计量学系数
发表时间：
2012-09-05 16:54:03
基于自动磁珠转运的转基因蛋白Cry1Ab检测
李爱玲 | -> | 1192| 0| 0.537872MB |转基因作物,磁分离,Cry1Ab蛋白,磁珠转运,免疫检测
摘要基于自动磁珠转运，建立了转基因蛋白Cry1Ab 免疫检测的新方法。利用水热法制备了粒径约
400 nm 的纳米磁球，并进行电镜表征，通过溶胶法对磁球表面进行氨基修饰，采用戊二醛偶联对磁珠实现抗体包被，在核酸提取仪中进行酶联免疫反应，采用分光光度法进行检测。本方法对转基因蛋白Cry1Ab 的检出限低于1 !g /L，与商品化酶联免疫试剂盒相当。本方法节约人力、严格控制时间，同时，所需设备成本较低，有望取代传统的手动检测技术。
400 nm 的纳米磁球，并进行电镜表征，通过溶胶法对磁球表面进行氨基修饰，采用戊二醛偶联对磁珠实现抗体包被，在核酸提取仪中进行酶联免疫反应，采用分光光度法进行检测。本方法对转基因蛋白Cry1Ab 的检出限低于1 !g /L，与商品化酶联免疫试剂盒相当。本方法节约人力、严格控制时间，同时，所需设备成本较低，有望取代传统的手动检测技术。
转基因作物( GMOs) 因其先进的生物技术优势而发展迅速。在1996 ～ 2008 年期间，种植面积增幅高达74 倍，每年的增长率超过9%［1］。虽然转基因作物有其独特的生物技术优势，但其对人和动物及环境的风险尚未得到充分评估。如潜在的物种间基因流动、破坏生物多样性、增强害虫的抗药性和对人类健康的威胁等因素，尚无法排除。因此，一些国家对转基因作物进行了立法，要求对含有转基因成分超过1%的产品进行强制标识，该含量后被降至0． 9%［2］。快速检测GMOs 成分是这些法规能否有效实施的关键。《Analytical and Bioanalytical Chemistry》期刊于2010 年3 月就GMOs 检测分析技术出版了专刊［3］。
目前，检测转基因生物及其制品的技术可分为两大类: 基于核酸的检测和基于蛋白质的检测［2］。核酸检测是检测其插入的外源基因，以聚合酶链式反应( PCR) 为主。PCR 法灵敏度高，但操作复杂，对测试人员有较高的技能要求［4］; 另外，它耗时长、成本高和难以实现高通量检测等也限制着其应用。蛋白层面的检测以免疫分析最为成功，包括酶联免疫吸附试剂盒( ELISA kit) 和金胶试纸等。ELISA 对操作的要求相对PCR 要简单，但对操作人员的技能要求也很重要［5］。试纸条操作简单，成本低廉，能较好地实现现场检测，但难以用于定量分析。另外，免疫生物传感器等新兴技术也被用于蛋白检测［6］。
生物磁珠因其优良的抗原捕捉能力而备受关注［7］。利用磁珠转运可以方便地实现各种生化反应步骤，而不需要复杂的流体控制系统。目前，磁珠转运应用于核酸提取和纯化的研究及装置较多，而除了医院所使用的大型免疫磁分离发光检测系统需要复杂流路控制外，用于免疫分析的报道较少。利用磁珠自动转运可以使操作流程更为标准化、统一化，同时降低操作劳动强度，对操作时间和条件的控制也十分精准。本研究利用自制的免疫磁珠，结合现有的核酸提取仪，通过免疫磁珠转运实现了对转基因蛋白Cry1Ab 的检测。
目前，检测转基因生物及其制品的技术可分为两大类: 基于核酸的检测和基于蛋白质的检测［2］。核酸检测是检测其插入的外源基因，以聚合酶链式反应( PCR) 为主。PCR 法灵敏度高，但操作复杂，对测试人员有较高的技能要求［4］; 另外，它耗时长、成本高和难以实现高通量检测等也限制着其应用。蛋白层面的检测以免疫分析最为成功，包括酶联免疫吸附试剂盒( ELISA kit) 和金胶试纸等。ELISA 对操作的要求相对PCR 要简单，但对操作人员的技能要求也很重要［5］。试纸条操作简单，成本低廉，能较好地实现现场检测，但难以用于定量分析。另外，免疫生物传感器等新兴技术也被用于蛋白检测［6］。
生物磁珠因其优良的抗原捕捉能力而备受关注［7］。利用磁珠转运可以方便地实现各种生化反应步骤，而不需要复杂的流体控制系统。目前，磁珠转运应用于核酸提取和纯化的研究及装置较多，而除了医院所使用的大型免疫磁分离发光检测系统需要复杂流路控制外，用于免疫分析的报道较少。利用磁珠自动转运可以使操作流程更为标准化、统一化，同时降低操作劳动强度，对操作时间和条件的控制也十分精准。本研究利用自制的免疫磁珠，结合现有的核酸提取仪，通过免疫磁珠转运实现了对转基因蛋白Cry1Ab 的检测。
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