银离子高效液相色谱_质谱法分析血清中甘油三酯类化合物的组成_杨芹

摘要: 针对甘油三酯( TAG) 类化合物的复杂性，建立了分析小鼠血清中TAG 类化合物的方法。采用经典的氯仿-甲醇溶剂体系对血中的TAG 类化合物进行提取。脂质提取物经Varian ChromSpher 5 Lipids 柱分离，在0. 75 mL/min的流速下以乙腈-正己烷( 1∶ 99，v /v) 为流动相进行等度洗脱，采用大气压化学电离源正离子模式电离，质谱增强型全扫描、增强型子离子扫描和中性丢失扫描模式检测。根据银离子色谱对双键的保留规律以及质谱所给出的碎片离子信息，对血清中TAG 类化合物进行了结构鉴定。结果表明采用该方法可以从小鼠血清中鉴定到66 个TAG 类化合物以及5 个胆固醇酯。该方法简单，重现性好，可通用于其他样品中TAG 类化合物的检测。

    甘油三酯( triacylglyceride，TAG) 类化合物由1个甘油分子与3 个脂肪酸酯化而成，是生物体内重要的储能物质［1，2］。TAG 的结构随脂肪酸种类及其与甘油分子结合位点的不同( stereo-specific number，sn-1，2，3) 而呈多样性，这使得TAG 类化合物成为一类极具复杂性的化合物。在大多数研究TAG 的文献中，单个TAG 分子多用其等价碳数( equivalent carbon number，ECN) 及双键个数( double bond number，DB) 来表示［2］。这一方面是由于TAG 脂肪酸
组成不易得到，另一方面则可能是在生物学上生物体对TAG 的利用更多的与其ECN 有关。TAG 的等
价碳数也称分离数( partition number，PN) ，与组成TAG 的3 个脂肪酸链的总碳数( carbon number，CN) 和DB 有关，其关系是: PN = CN － 2DB［3］。
    目前诸多分析手段已成功应用于TAG 类化合物的分离分析。临床上广泛使用的酶解法一般采用
商品化的试剂盒，方便快捷，结果准确。但其所得到的信息是关于血清中TAG 的总量，并不能提供TAG组成的具体信息［4，5］。对此，需借助于色谱或光谱学的方法［6，7］。这类分析方法可以得到TAG 类化合物单体的信息，更有利于我们了解单个TAG 分子的作用及结构。已被应用于TAG 的分析中的色谱方法包括薄层色谱法［8］、气相色谱法［9， 10］、高效液相色谱法［11， 12］、银离子色谱法［13， 14］、超临界流体色谱法［15］及体积排阻色谱法［16］等。其中应用最广泛的是非水反相色谱和银离子色谱。在反相色谱中，由于影响TAG 极性的不只有脂肪酸链的长短，还有其双键个数，所以TAG 类化合物在反相色谱中的保留行为是其分子中的双键和PN 共同作用的结果。对银离子色谱而言，TAG 类化合物的保留主要与其分子中双键个数相关。双键个数多的TAG 类化合物在银离子柱上的保留较强。Lísa 等［17］通过随机酯交换反应得到了一系列包括位置异构体在内的TAG 标准品，然后通过3 根银离子柱的串联分离了部分TAG 的位置异构体。反相色谱和银离子色谱方法还可以离线或在线联用二维系统分析TAG 类化合物［3， 18］。用于TAG 类化合物的检测手段则囊括了紫外［19］、质谱( MS) ［12， 19 － 26］、蒸发光散射［12， 19］、火焰离子化［21］、示差折光［27］等方法，其中占主导地位的是质谱方法。
    本研究采用银离子高效液相色谱-大气压化学电离质谱( Ag + -HPLC /APCI-MS) 联用技术，根据甘油三酯在银离子柱上的保留规律及其在APCI 电离模式下的质谱裂解规律来检测和鉴定小鼠血清中的TAG 类化合物。为了验证TAG 类化合物中脂肪酸的种类及定性结果的准确性，我们还对组成TAG 类化合物的30 种脂肪酸做了中性丢失扫描。本实验同时还检测到了与TAG 极性相近的胆固醇酯( cholesteryl ester，CE) 类化合物。