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酿酒酵母胞浆中乙醛脱氢酶的提取和研究

章蒲 | -> | 942| 3| 0.293888MB |微生物,酿酒酵母,乙醛脱氢酶,纯化

章蒲 章蒲 | 文档量 |浏览量10965

摘要: 利用超声波破碎、硫酸铵分级盐析以及DEAE-32 阴离子交换层析等方法提取了酿酒酵母胞浆内的乙醛脱氢酶(ALDH),并对其酶学性质进行了研究。结果表明,经过DEAE-32 交换层析后得到的ALDH 酶液,纯化倍数为11,产率为17 %,酶的最适反应温度为25℃,最适pH 在7.0~7.5 之间。
    在人体中,乙醛脱氢酶(ALDH)能够将乙醛转化为乙酸,将乙醛及时代谢出体外,从而减少乙醛对人体的伤害。研究发现,50 %的亚洲人携带无活性的乙醛脱氢酶,大量饮酒后肝脏内大量累积的乙醛可能会引起酒精引导性肝损伤[1]、食管癌、口咽喉癌等多种疾病[2]。因此,利用乙醛脱氢酶作为解酒药,是较好的解酒方法。自然界中乙醛脱氢酶的含量很少,从动植物体内提取成本很高,而微生物具有易于培养、培养周期快等优点,因而从微生物中提取乙醛脱氢酶具有很大的市场前景, 在国外已有对此酶的提取纯化研究,但在国内却极少有报道[3]。
    酿酒酵母中ALDH 有两种存在方式。一种存在于线粒体中,另一种则在胞质中。其主要有两种激活方式,一种是Mg2+ 激活的,NADP+ 依赖的胞质酶,另一种是葡萄糖抑制的,NAD(P)+ 依赖的,K+ 激活的线粒体酶。胞质内的ALDHs 包括ALDH6,ALDH2 以及ALDH3 3 种同工酶[4]。由于在葡萄糖生长条件下,酵母中乙酸的产生主要由胞质内ALDH6 将乙醛氧化形成, 其次由于胞浆的破碎易于线粒体的破碎,因而本文主要利用超声波破碎、硫酸铵分级盐析以及DEAE-32 阴离子交换层析对胞浆内的ALDH 进行初步提取及其酶学性质研究。
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