怎样更好的控制毛细管电泳的重现性？？

毛细管首次使用或长时间不用后重新使用，应清洗毛细管内壁表面并用稀碱液活化。一般使用浓度为0. 1一1 mol/L的盐酸、氢氧化钠溶液和高纯水按一定程序冲洗即可，必要时可以使用1 mol/L的氢氟酸溶液冲洗约30s。还可以使用碱性甲醇处理法预处理石英毛细管。酸性及碱性溶液处理毛细管对电渗流的影响，不同冲洗程序对组分迁移时间和校正峰面积精密度的影响已有较系统的研究。酸液中的H+对管壁上吸附的阳离子有很强的置换能力;碱液对去污及活化管壁作用显著。具体的清洗程序应根据实验情况灵活设计。电泳分析过程中的管壁吸附现象不可避免并具有很大的随机性。当吸附发生时，电渗流改变，液流紊乱(不均匀吸附)并影响到组分的峰形，出现谱带展宽、响应及分离度下降、迁移时间改变等现象。预处理程序可以清除记忆效应，使管壁状态复原。采用0. 1一lmol/L的氢氧化钠溶液、0. lmol/L盐酸溶液、甲醇、磷酸溶液或SDS溶液等冲洗毛细管，可以缩短迁移时间，提高峰面积的重现性。但除非吸附严重，一般只需用缓冲液冲洗3 -5min即可。不同的毛细管预处理程序清洗效果不同，可使组分总体迁移时间出现显著差异。毛细管使用完毕后，应用水充分冲净(约5 }- lOmin或至少柱体积5倍以上的水量)，然后用高纯氮气吹干后保存。

电泳分析的整个过程都伴随着电解现象，溶剂挥发也不可避免。由于溶剂挥发，缓冲液的浓度、组成、pH值以及管壁电位等将受到严重影响，并易产生气泡。采用大容量缓冲液槽，及时更新缓冲液，选择高浓度低电导的硼酸、醋酸盐、IVIES、Tris缓冲体系'，或加入适当的氧化还原剂减缓电解质电解，对减少溶剂挥发的影响，增加分析次数叫等，有明显效果。

毛细管电泳的进样方式主要有扩散进样、电渗进样和压力进样。与高效液相色谱相比，毛细管电泳进样重现性较差，成为影响毛细管电泳推广应用的主要障碍。要达到进样量准确一致，样品带窄，边缘清晰，需要注意以下几方面的问题。

1、石英毛细管端口状况

毛细管端口应光滑平整，否则电场在入口处会扭曲失真，导致样品带展宽。端口处的聚酰亚胺层应该去除，否则会在有机溶剂中膨胀变松，并有可能堵塞进样口。去除毛细管端口聚酰亚胺层还可减少毛细管外侧的样品残留，避免引起基线漂移，采用毛细管专用切割器进行环形切割将明显改善端口质量。

2、扩散及反重力流

扩散效应对于扩散系数大的小分子、窄样品带和缓慢进样程序的分析影响较大；而反重力流一般是储液槽液面的高度差异造成的，对窄样品带和短的、较大口径的毛细管电泳分析影响较大。计算机模拟结果显示，在毛细管最初几毫米距离内组分浓度变化迅速_4。采用长而细的凝胶填充的毛细管或采用高粘度的背景缓冲液，并保持缓冲液液面高度的一致，可有效降低以上两个因素对进样的影响

3、进样方式

进样重现性与具体进样方式无关，而与相应方式的条件控制有关。扩散进样样品带长度和进样量控制困难，现已较少采用。样品溶液的溶剂和基质不同，同样条件下的进样量也不一样，这是由样品的粘度、扩散状况以及电歧视效应等不同造成的如果样品基质差异大，如某些生物样品，选用压力进样较好。电渗进样容易造成组分峰丢失，且重现性较差。

4、影响进样质量的其它因素

(1)电析出。缓冲液介质的电排斥作用可能导致已进样组分的析出或溶解不完全。所以，溶解样品的溶剂与背景缓冲液的性质应尽量接近。

(2)进样时间。进样8s的重现性优于2s及25s。笔者认为，这是由于短时间的压力进样

液流局部微扰造成的不确定性依然存在；时间过长则扩散效应的影响会显现出来。

(3)样品高压损失。分离开始时突然施加高电压，“过热效应”可能造成已进样品的损失，且不可预知。采用在约30s内电压从0升至设定高压的渐进升压方式较好，一般升压速度不大于900V／s。也可以采取进样后立即注入一段缓冲液来改善进样重现性。

(4)管口液滴。毛细管离开储液瓶时可在毛细管端口形成大小不一的液滴。它的大小受外界振动影响大。液滴表面张力使液体向毛细管内收缩。远离振动源并尽量缩短毛细管在各储液瓶间的转移时间十分重要。

(5)样品温度控制。进样装置部分应有温控装置，防止样品黏度变化对进样量产生影响。

(6)过载和电泳分离过程中的相互作用对进样质量也有影响。