色谱柱堵塞

色谱柱堵塞

请问高人，我用的是C18反相填充柱，流动相（甲醇：水=50：50）平衡时一切正常，压力7左右，当进样品后压力急剧升高，超过20。我把柱子拆下，检查保护柱出口压力很正常，证明是柱子堵塞。我接上柱子用水反冲（流速0.5，压力也达到14左右）...

请问高人，我用的是C18反相填充柱，流动相（甲醇：水=50：50）平衡时一切正常，压力7左右，当进样品后压力急剧升高，超过20。我把柱子拆下，检查保护柱出口压力很正常，证明是柱子堵塞。我接上柱子用水反冲（流速0.5，压力也达到14左右）1小时，慢慢的压力有所减小，然后再用乙腈正冲，冲的过程中发现压力慢慢减小，我就不断将流速调高到2，此时压力可降到8，再用甲醇冲洗压力也不高（流速2时压力为12），我以为此时柱子已经恢复正常。但是当我将流动相改为加水时压力又急剧上升，上升的幅度随含水比例升高而增大，证明柱子仍然没有恢复正常。所以在此请教各位怎样才能使柱子恢复正常？

堵塞的原因可能是：我用的流动相是甲醇：水=50：50，样品是聚丙烯酰胺（重均分子量30万左右）用水稀释，用定性滤纸过滤后再用0.45微米的过滤头过滤进样，高分子遇到50%的甲醇会凝聚析出而堵塞。

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