槐花中芦丁含量测定遇到的问题

使用一个放置了一年没用的C18柱测定槐花中的芦丁含量，按照药典上的方法进行测定。条件：甲醇：1%醋酸=32:68，检测波长257，流速1.0ml/min操作步骤是：分别称量0.2g的槐花和0.1g的槐米，加入50ml甲醇，称重，超声30...

使用一个放置了一年没用的C18柱测定槐花中的芦丁含量，按照药典上的方法进行测定。
条件：甲醇：1%醋酸=32:68，检测波长257，流速1.0ml/min
操作步骤是：分别称量0.2g的槐花和0.1g的槐米，加入50ml甲醇，称重，超声30min，用甲醇补足失重，过滤，然后分别移取2ml到10ml的容量瓶中，使用甲醇进行定容。过滤进样测定。
对照品制备：称取0.01g含98%的芦丁，使用甲醇溶解并定容至50ml，进样测定。

问题一：我进行了几次实验（分几天进行），在同样的条件下进行测定，发现芦丁峰出现时间相差很大，第一次出峰时间为5分钟，第二次出峰时间为20几分钟，第三次出峰时间为40几分钟，为什么会出现这种现象。
问题二：在进行对照品测定时发现，对照品的峰面积很小，例如对照品的峰面积2800，槐米的为1832，槐枝的为1320，有一个别人测定含量为80%几的芦丁样品峰值出来却为2843，这样测定出来的样品百分值分别为32%，12%和98%，感觉相差很大。将芦丁稀释成0.01mg/ml测定时，峰面积为约为1200左右，感觉芦丁对照品的响应值很低，为什会这样呢？