苯并芘最新快速检测方法
固相萃取柱:HiCapt Benzo苯并芘专用柱(500mg/3mL,订货号:0946150)
液相色谱柱:HiSep C18-T 150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm(订货号:0246150)
苯并[a]芘是一种众所周知的有害有机化合物,具有致突变和致癌的特点,被环境保护署(EPA)列为环境优先控制污染物。食用油中苯并[a]芘的浓度极低,分析非常困难。国家标准方法(GB/T 22509-2008)采用氧化铝固相萃取柱净化样品,但氧化铝的活性不易控制,样品处理过程复杂,方法回收率难以得到保证。
本文应用维泰克科技(武汉)有限公司的HiCapt Benzo苯并[a]芘专用固相萃取柱,开发了食用油中苯并[a]芘的快速检测方法,该方法具有以下特点:
· 专利创新的苯并[a]芘专用萃取填料,有效去除食用油中的中性脂肪和维生素等基质干扰
· 回收率稳定、重现,克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷
· 方法简单、快速、节省溶剂,只需要15mL溶剂、45min即可完成(传统分析大约需要800mL溶剂,耗时8小时)。
· 是用于苯并[a]芘分析的一种好方法
1. 样品处理
1.1 样品提取:(参考国标GB/T GB/T 22509-2008)
称取0.4g植物油,取2mL正己烷溶解,涡混1min,,待净化。
1.2 固相萃取柱净化:HiCapt Benzo苯并芘专用柱(500mg/3mL)
(1)活化:在HiCapt Benzo柱中依次加入5mL丙酮,2 mL正己烷活化。
(2)萃取:将待净化液加入HiCapt Benzo柱中(在柱中正己烷液面为2mm时上样,此过程不要使柱干涸),再用200μL正己烷淋洗样品管,一并加入SPE柱中。流出液弃去。
(3)清洗:待上样液完全流出后,用3mL的乙酸乙酯:正己烷(v/v=1:4)溶液淋洗,淋洗液弃去,将小柱抽干。
(4)解吸:3mL丙酮解吸,收集解吸液。
(5)吹干及定容:解吸液50℃氮气吹干,加入异丙醇200μL溶解并定容,待分析。
2.色谱条件:
色谱柱:HiSep C18-T (150 mm×4.6 mm i.d.,5 μm);
流动相:乙腈/水溶液(88:12,v/ v);流速:1 mL/min;
荧光检测器:激发波长:384nm 发射波长:406nm;
柱温:40℃;进样量:10 μL。
3. 苯并[a]芘标准溶液液的配制
储备溶液的配制:
标准储备液1:称取苯并[a]芘5mg,用乙腈定容至10mL, 配制成500mg/L的标准储备液供HPLC分析
标准储备液2:称取苯并[a]芘5mg,用正己烷定容至10mL,配制成500mg/L的标准储备液供SPE试验;
将上述储备液密封后放置于4℃冰箱中避光保存,至少6个月内稳定。
工作溶液的配制:
取苯并[a]芘标准储备液1用乙腈稀释, 供HPLC分析;取苯并[a]芘标准储备液2用正己烷稀释供SPE试验。
标准曲线:
将500mg/L的苯并[a]芘标准储备液1用乙腈稀释,配制0.5、1.0、20、40μg/L的溶液,绘制标准曲线。
4 结果
4.1 标准曲线与检出限
取0.5,1.0,20.0,40.0μg/L 4个浓度的系列标准溶液进样分析,以样品浓度为Y轴、峰面积为X轴进行线性回归,所得标准曲线如图1。线性范围为0.5~40μg/L,相关系数为0.99999。
检出限:以3倍信噪比计算本方法苯并[a]芘的检出限为0.03ug/kg。
4.2 回收率和精密度
分别加入低、中、高3种质量浓度的苯并[a]芘标准溶液于食用油样品中,然后按照本实验方法进行测定,回收率为92.8~98.5%(见表1)。图2为添加苯并[a]芘的食用油样品的色谱图。从该图可以看出,没有杂质干扰,且该方法具有较好的日内及日间精密度(见表1),其标准偏差分别小于5.55%和4.71%。
表1:方法的回收率和日内、日间精密度
分析物 |
添加水平(μg/kg) |
回收率(%) |
RSD% | |
日内(n=5) |
日间(n=3) | |||
苯并[a]芘 |
2.5 |
92.8 |
5.55 |
4.04 |
5.0 |
98.3 |
3.30 |
2.24 | |
10.0 |
98.5 |
2.79 |
4.71 |
结果表明,本实验方法对植物油中苯并[a]芘提取具有良好的回收率,杂质去除效果好;方法重复性好。
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