做慢病毒，很头痛，向大家请教几个问题

第一次做慢病毒，很头痛，向大家请教几个问题。 1. 我做的是和别的实验室合作课题，是做RNA干扰，他们提供了质粒，但我不知道名称，一共四个质粒，我猜测可能是invitrogen 的BLOCK-iT，我3个包装质粒和载体质粒质量比是1:1...

第一次做慢病毒，很头痛，向大家请教几个问题。 1. 我做的是和别的实验室合作课题，是做RNA干扰，他们提供了质粒，但我不知道名称，一共四个质粒，我猜测可能是invitrogen 的BLOCK-iT，我3个包装质粒和载体质粒质量比是1:1:1:2，请问这样对吗？ 2. 我在转染293细胞后发现荧光很多，几乎100%，这是不是代表产出的病毒也会很高？ 3. 第3天开始收集上清，上清是不是可以直接用来感染细胞，而不用浓缩？ 4. 因为浓缩后的病毒最后还是要稀释，一般稀释100-10000倍，那直接用上清是不是更好。 5. 感染新的293细胞后接连3天都没见到一个荧光细胞，第四天才发现几个针尖大的光点，是我的病毒滴度低还是活力不够，还是转染问题。 6. 包装出来的慢病毒是不是包含gag、pol 、env三种蛋白外，还包括GFP蛋白和RNA？我发现虽然我感染的细胞没有发荧光，但其背景偏绿，而没有感染的细胞，其背景是黑色的？