化学发光酶免疫分析测定鱼肉中呋喃它酮代谢物方法研究_戴尽波

SDY | -> | 478| 0| 0.471426MB |映喃它酮;s}马琳甲基一氛基一嗯哩烷基酮;间接竞争化学发光酶免疫分析;多克隆抗体;鱼肉

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    吠喃它酮( Furaltadone)是一种硝基吠喃类广谱抗生素,对大多数革兰阳性菌、阴性菌均有抗菌作
用,常用于水产动物的各种肠道感染性疾病的治疗、也被用作畜禽促进生长的添加剂[Cil吠喃它酮原
药在体内可迅速代谢为5}}琳甲基一氰基}_p,} pox烷基酮(AMOZ),与蛋白结合形成稳定化合物,可长
期存在于动物组织内,但在弱酸性条件下AMOZ与蛋白结合物可以发生水解从蛋白质中释放出来,故
通常将AMOZ作为监测吠喃它酮的靶化合物[}z}。当食用含有硝基吠喃类抗生素残留的食品时,在胃液
酸性条件下,AMOZ同样会释放出来,从而被人体吸收。有关研究证明,AMOZ具有很高的毒性和副作
用,有致突变、致畸和致癌作用[o.a}。因此,1995年欧盟开始全面禁止该类药物在畜牧业使用,并在2003年
规定动物源性食品中的残留检出限为1.0 },g/kg;我国也在2002年发布动物性食品中兽药最高残留限量
标准,明确规定吠喃它酮为在动物性食品中不得检出的项目[Cs.}7。但是因其高效廉价,被非法应用于畜牧
和水产养殖的情况仍时有发生,故有必要对动物源性食品中吠喃它酮及其代谢物AMOZ加强监控。
    AMOZ检测方法主要有色谱法和免疫分析法。色谱法包括高效液相色谱法、液相色谱法领谱联用
技术等}s_}}},具有灵敏度高、特异性好、精确度高和假阳性率低等特点,但存在仪器设备昂贵、操作技术
要求高、样品处理复杂和检测成本高等不足,较难广泛应用于大规模样品检测。免疫分析法包括酶联免
疫分析(ELISA) }'z}、荧光偏振免疫分析(FPIA)、化学发光免疫分析(C LEIA}等D3 -zo7,具有简单、快速、
灵敏度高、特异性强和高通量等优点。杨武英等Czol制备了AMOZ的单链抗体,并建立了相应的免疫分
析方法。本课题组的前期工作中制备了抗AMOZ多克隆抗体和单克隆抗体,并建立了ELISA分析方
法[o}.}s}。本研究在前期获得抗体的基础上,进一步优化了检测条件,以发展灵敏度更高的CELIA方法,
采用两种不同的方法建立标准曲线对实际样品进行检测,消除衍生率带来的误差,使检测结果更准确可
靠。结果表明,建立的icCLEIA具有较高的选择性、灵敏度、稳定性与准确度。
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