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关键词：
聚合离子液体;石墨烯;固相萃取;有机磷农药
发表时间：
2017-02-07 11:47:20
采用X射线衍射解析人鸟嘌呤核苷酸_省略_DS_Ras结合结构域的空间结构_黄雪英
宋丹杨 | -> | 563| 0| 0.959497MB |鸟嘿吟核普酸解离刺激因子(Ra1GDS};Ra、结合结构域(RBD};Ras蛋白
Ras蛋白是一类小型GTP;结合蛋白，能作为分子开关祸合细胞外信号，从而调控不同的细胞应答。
细胞信号通路中，Ras蛋白表现为无活性的GDP结合形式和有活性的GTP结合形式两种构象。通过两
种构象之间的转换，调节细胞生长、细胞流动性及细胞增殖[ca。在GTP结合区，Ra、蛋白通过与Rafs丝
氨酸/苏氨酸激酶、磷脂酞肌醇3檄酶}PI3-kinase) ,Ral鸟嘿吟核普酸置换因子(Ra1}EFs}等效应分子
结合，激活类似的通路[}z.o。鸟嘿吟核普酸解离刺激因子(Ra1GDS)家族四个成员(Ra1GDS, RGL, RGL2 /
RLf和RGL3 )含部分相同结构，均含一个带上游Ras交换锚的中央CDC25同源结构域和一个C}l} Ras /
Rap同源结构域(RB D)(图1 A}。通过C端RBD } Ra1GDS蛋白结合Ras及Ras相关蛋白。
目前，己利用核磁共振和X衍射法分析了RBD、的三维结构[C4,5]。虽然Ra1GDS家族各成员RBDs
残基没有明显的序列同源性，但它们的三维结构非常相似，各Ra1GDS}BD含泛素样构象(呈那哮弼明
型三级结构特征)，但Ra、结合区和疏水核心[2 - 5」却存在结构差异。这些特点导致Ra1GDS}BD、与
Ras / Rapl A的不同结合。从Rap和Ras效应区的突变情况来看，残基31对Ras / Rap特异性结合Raf-
RBD、至关重要[0]。虽然鼠和人RBD、有很高的全序列同源性和结构相似性，但与Ra、蛋白结合的鼠
Ra1GDS}BD和人Ra1GDS}BD残基还是有一些不同。经最关键的Raf途径，Ras介导正常鼠细胞致
瘤;经关键的Ra1}EF、途径，Ra、介导正常人细胞致瘤[Cs.}l鼠Ra1GDS}BD的空间结构虽然早己解
析，与人Ra1GDS}BD的空间结构相似性较高，但还是有种属差异。以鼠Ra1GDS}BD为靶标研究Ral-
GDS}BD引起的相关疾病，并根据鼠Ra1GDS}BD的空间结构及作用机制为人设计药物就会有较大误
差。因此，为更好地了解人Ra1GDS}BD特异性结合Ras蛋白的结构基础，本研究制备了人Ra1GDS-
RBD蛋白晶体，并分析Ras结合残基及各RBDs三维结构的特点，特别是人和鼠Ra1GDS}BD的差异，
为下一步研究由于人和鼠Ra1GDS}BD的空间结构的差异导致细胞功能的差异奠定基础，同时也可以
为根据人Ra1GDS}BD的空间结构及作用机制设计药物提供重要参考。
细胞信号通路中，Ras蛋白表现为无活性的GDP结合形式和有活性的GTP结合形式两种构象。通过两
种构象之间的转换，调节细胞生长、细胞流动性及细胞增殖[ca。在GTP结合区，Ra、蛋白通过与Rafs丝
氨酸/苏氨酸激酶、磷脂酞肌醇3檄酶}PI3-kinase) ,Ral鸟嘿吟核普酸置换因子(Ra1}EFs}等效应分子
结合，激活类似的通路[}z.o。鸟嘿吟核普酸解离刺激因子(Ra1GDS)家族四个成员(Ra1GDS, RGL, RGL2 /
RLf和RGL3 )含部分相同结构，均含一个带上游Ras交换锚的中央CDC25同源结构域和一个C}l} Ras /
Rap同源结构域(RB D)(图1 A}。通过C端RBD } Ra1GDS蛋白结合Ras及Ras相关蛋白。
目前，己利用核磁共振和X衍射法分析了RBD、的三维结构[C4,5]。虽然Ra1GDS家族各成员RBDs
残基没有明显的序列同源性，但它们的三维结构非常相似，各Ra1GDS}BD含泛素样构象(呈那哮弼明
型三级结构特征)，但Ra、结合区和疏水核心[2 - 5」却存在结构差异。这些特点导致Ra1GDS}BD、与
Ras / Rapl A的不同结合。从Rap和Ras效应区的突变情况来看，残基31对Ras / Rap特异性结合Raf-
RBD、至关重要[0]。虽然鼠和人RBD、有很高的全序列同源性和结构相似性，但与Ra、蛋白结合的鼠
Ra1GDS}BD和人Ra1GDS}BD残基还是有一些不同。经最关键的Raf途径，Ras介导正常鼠细胞致
瘤;经关键的Ra1}EF、途径，Ra、介导正常人细胞致瘤[Cs.}l鼠Ra1GDS}BD的空间结构虽然早己解
析，与人Ra1GDS}BD的空间结构相似性较高，但还是有种属差异。以鼠Ra1GDS}BD为靶标研究Ral-
GDS}BD引起的相关疾病，并根据鼠Ra1GDS}BD的空间结构及作用机制为人设计药物就会有较大误
差。因此，为更好地了解人Ra1GDS}BD特异性结合Ras蛋白的结构基础，本研究制备了人Ra1GDS-
RBD蛋白晶体，并分析Ras结合残基及各RBDs三维结构的特点，特别是人和鼠Ra1GDS}BD的差异，
为下一步研究由于人和鼠Ra1GDS}BD的空间结构的差异导致细胞功能的差异奠定基础，同时也可以
为根据人Ra1GDS}BD的空间结构及作用机制设计药物提供重要参考。
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