高效液相色谱_质谱联用快速筛选并鉴定黄芩甲醇提取物中抗氧化活性成分

刘海和 | -> | 588| 0| 0.413286MB |高效液相色谱-质谱联用,筛选,二苯基三硝基苯肼,抗氧化活性,黄芩

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摘要建立了高效液相色谱-质谱联用技术快速筛选和鉴定黄芩甲醇提取物中抗氧化活性成分的方法。在黄芩甲醇提物中加入适量的二苯基三硝基苯肼( DPPH·) 作为实验组,避光室温反应30 min 后直接经液相色谱分析,并与不加入DPPH·的空白组进行比较。有抗氧化活性的成分因会与DPPH·反应而使峰面积减少,而不具有抗氧化活性的成分峰面积则不变。基于色谱数据可以获得有抗氧化活性组分的相对活性强度,基于质谱数据可获得活性组分的结构信息用于结构鉴定。本方法成功地从黄芩甲醇提取物中筛选并鉴定出了黄芩苷、千层纸素A-7-O-Β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷和千层纸素A4 种较强的抗氧化活性成分。本方法利用HPLC-MS 技术对复杂体系( 如中药提取物) 中小分子的分离和鉴定优势,可以直接筛选出黄芩甲醇提取物中的抗氧化活性成分,而不需要繁琐的前期分离和纯化,并且不需要仪器改装工作,有利于实现复杂体系中抗氧化活性成分的高通量筛选。
    自由基的存在非常广泛,其氧化反应可以引起食物腐败、细胞衰老和各种疾病,给人类的健康带来危害。因此,抗氧化剂的检测和筛选对于保障人类健康、提高食品安全具有深远意义。抗氧化剂除人工合成外,还可以从中草药中提取分离获得,这不仅利用了中草药这个天然的组合化学库,而且降低了人工合成抗氧化剂带来的毒副作用[1]。由于中草药成分复杂,采用常规方法提取其中的抗氧化活性成分费时费力,并且在分离过程中可能导致微量活性组分丢失。因此,迫切需要发展一种快速、高效的抗氧化活性成分的筛选方法。目前,已建立了基于高效液相色谱-质谱联用的植物提取物中抗氧化活性成分的在线筛选方法[2 ~ 8],成功筛选出了多种抗氧化活性成分,并对其结构进行了鉴定。这些方法需要改装仪器和增加柱后反应通道,并需要额外的检测器用于二苯基三硝基苯肼( DPPH·) 的检测( 517 nm) ,限制了该方法的广泛应用。本研究采用高效液相色谱-质谱联用( HPLC-MS) 技术,不需要任何改进工作,建立了一种更为简单快捷的抗氧化活性成分的检测、筛选和结构鉴定方法。
    DPPH·是一种人工合成的稳定的自由基,可以被抗氧化活性物质猝灭,是一种良好的体外抗氧化筛查剂,已经得到了广泛的应用[9]。黄芩是常用的中药材之一,是唇形科植物黄芩的干燥根,具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎的功效。黄芩具有很好的抗氧化能力,并且主要的抗氧化活性成分是易溶于醇类的黄酮类化合物,并已经对这类化合物的总抗氧化能力及有效成分的提取、分离、结构鉴定进行了研究[10 ~ 12]。本研究利用黄芩建立了基于HPLC-MS 联用的抗氧化活性成分的快速筛选方法。将黄芩甲醇提取物与DPPH·混合反应后,直接用色谱分析。用等量的甲醇代替DPPH·作为空白对照组,通过比较各组分的色谱峰面积的变化确定和评价各组分的抗氧化活性,从中筛选出4 种有较强抗氧化活性的成分,并采用HPLC-MS 对4 种成分进行了鉴定,不仅证明了黄芩具有很好的抗氧化活性,而且表明本方法可以在中药提取物这种复杂体系中实现简单快捷的抗氧化活性的高通量筛选。
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