纤维素水解液厌氧发酵产丁二酸发酵液中有机酸和混合单糖的测定

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摘 要 对于以纤维素类原料(玉米皮)水解糖液作碳源厌氧发酵制备丁二酸的发酵液,利用Aminex
mHPX287H (300 mm ×718 mm i. d. , 5μm)离子排斥色谱柱及折光示差检测器检测,以01005 mol/L H2 SO4 溶液(pH210)作流动相,在流速为016 mL /min,柱温为55 ℃时对发酵液进行检测, 16 min内能将发酵液中甲酸、乙酸、丁二酸、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖完全分离定量。6种物质线性相关系数均大于01999,方法的回收率为9913% ~10211%; RSD为016%~116%。本方法能够简便、快速测定丁二酸发酵体系中有机酸及单糖的含量。
关键词 高效液相色谱,玉米皮水解液,丁二酸发酵液,有机酸,混合单糖
    自1991年Doyon等[ 1 ]首次报道了用HPLC在同一条件下同时检测有机酸和糖的混合标准溶液后,关于高效液相色谱法同时检测糖及有机酸的报道越来越多[ 2~10 ] 。有机酸发酵过程中底物和有机酸产物同时检测对于发酵过程监控具有指导意义。钱兵等[ 8 ]以反相高效液相色谱法测定丙酸发酵液中有机酸;白冬梅等[ 9 ]利用Eclip se XDB2C8柱同时检测琥珀酸发酵液中的有机酸和葡萄糖;刘宇鹏等[ 10 ]利用Aminex HPX287H离子排斥色谱柱同时检测琥珀酸发酵液中的葡萄糖、有机酸及乙醇,但所检测的发酵液都只利用单一底物(葡萄糖)作为发酵碳源。当前利用木质纤维素资源制备生物基化学品已成为一种必然的趋势。木质纤维素的水解液成分复杂,若能采用HPLC同时检测发酵体系中混合糖及代谢产物,对于考察木质纤维素水解液的利用情况以及菌株代谢过程具有积极的意义。
    丁二酸(又称琥珀酸)作为重要的C4 平台化合物,被美国能源部认为是未来12种最具前景的生物炼制产品之一[ 11 ] 。目前利用木质纤维素资源生产丁二酸可有效降低生产成本,本课题组以玉米皮水解液作为生产琥珀酸放线杆菌培养的碳源,其中含有六碳糖(葡萄糖)和五碳糖(木糖和阿拉伯糖)以及少量乙酸等物质,成分较复杂。本实验选用AminexÓHPX287H离子排斥色谱柱,利用示差折光检测器,建立了高效液相色谱法同时检测玉米皮稀酸水解液厌氧发酵制备丁二酸的发酵液中有机酸和混合单糖的方法,对于利用木质纤维素资源制备其它有机酸产品具有参考价值。
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