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关键词：
树干呼吸,时空变异,树干温度,液流,维持呼吸
发表时间：
2013-11-28 16:45:11
摘 要 阿魏酸酯酶是参与半纤维素降解的重要酶类. 为了提高阿魏酸酯酶的活性和其它性能，本文作者采用RTPCR技术从黑曲霉CIB 423.1中克隆了编码阿魏酸酯酶A的cDNA，构建了外泌表达的质粒，并将其转化到毕赤酵母GS115进行表达. 通过检测培养液上清中的酶活，表明阿魏酸酯酶已成功在这一体系表达. 同时，本文还建立了快速、稳定的酶活检测体系，为后续对阿魏酸酯酶酶突变体活性进行高通量筛选奠定了基础. 图5 参17
阿魏酸酯酶对植物细胞壁的降解具有重要作用，主要降解植物细胞壁多糖如阿拉伯木聚糖、果胶等中的阿拉伯糖或半乳糖与羟基肉桂酸之间的酯键[1]. 这类酶与其他的糖类水解酶如β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶、纤维素内切酶等联合作用可较彻底地降解植物细胞壁[2]. 阿魏酸酯酶对羟基肉桂酸的降解可使木聚糖等降解半纤维素的酶类更容易接近底物而加速降解半纤维素. 实验证明，阿魏酸酯酶与木聚糖酶联合水解植物细胞壁比阿魏酸酯酶单独水解植物细胞壁所产生阿魏酸的量提高了很多，这是由于木聚糖酶生成短链的阿魏酸酯化寡聚木聚糖而使阿魏酸酯酶更容易接近底物[3].
阿魏酸酯酶已经在多种真菌和细菌中被发现，如乳酸菌和乳酸杆菌[4]、热纤梭菌[5]、黑曲霉[6]、泡盛曲霉[7]等. 这些已发现的阿魏酸酯酶的生物化学特性都已被证明，而且一些酶已经在大肠杆菌[8] 、黑曲霉和泡盛曲霉[9]、毕赤酵母[10~12]等表达系统中得到了较好的外源表达. 随着生物能源和其他生物制品的开发，目前工业上对阿魏酸酯酶的需求很大，而应用于工业的阿魏酸酯酶主要由黑曲霉生产. 由于黑曲霉的阿魏酸酯酶对高温、酸或碱等条件耐受性不足，很大程度上限制了阿魏酸酯酶在工业上的应用. 通过分子生物学学手段改造阿魏酸酯酶以使其对高温、酸或碱等条件具有较好的耐受性，从而能更广泛地应用于工业生产.
我们利用实验室保藏的黑曲霉菌株Aspergillus niger CIB423.1，通过RT-PCR技术克隆了编码阿魏酸酯酶A的cDNA，并在毕赤酵母GS115中进行外泌表达. 为了对后续试验中利用分子生物学手段改造的阿魏酸酯酶进行高通量筛选，我们还建立了快速、灵敏的酶活检测方法.
阿魏酸酯酶已经在多种真菌和细菌中被发现，如乳酸菌和乳酸杆菌[4]、热纤梭菌[5]、黑曲霉[6]、泡盛曲霉[7]等. 这些已发现的阿魏酸酯酶的生物化学特性都已被证明，而且一些酶已经在大肠杆菌[8] 、黑曲霉和泡盛曲霉[9]、毕赤酵母[10~12]等表达系统中得到了较好的外源表达. 随着生物能源和其他生物制品的开发，目前工业上对阿魏酸酯酶的需求很大，而应用于工业的阿魏酸酯酶主要由黑曲霉生产. 由于黑曲霉的阿魏酸酯酶对高温、酸或碱等条件耐受性不足，很大程度上限制了阿魏酸酯酶在工业上的应用. 通过分子生物学学手段改造阿魏酸酯酶以使其对高温、酸或碱等条件具有较好的耐受性，从而能更广泛地应用于工业生产.
我们利用实验室保藏的黑曲霉菌株Aspergillus niger CIB423.1，通过RT-PCR技术克隆了编码阿魏酸酯酶A的cDNA，并在毕赤酵母GS115中进行外泌表达. 为了对后续试验中利用分子生物学手段改造的阿魏酸酯酶进行高通量筛选，我们还建立了快速、灵敏的酶活检测方法.
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