食品中拟态弧菌变性高效液相色谱检测技术研究

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摘 要:应用PCR 结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术对食品中致病菌——拟态弧菌进行检测,探讨其灵敏度特异性,建立快速高通量检测食品中拟态弧菌的新方法。利用DHPLC 在非变性温度下进行双链DNA 分离的原理,应用DHPLC 技术分析拟态弧菌特异性PCR 扩增产物。在优化的分析条件下,对样品洗脱峰排列形成的聚类分析图进行分析,得到拟态弧菌的特征峰型图谱。结果表明该方法有很好的特异性。与传统检测方法进行比较该方法准确度为100%。本实验建立的食品中拟态弧菌PCR-DHPLC 检测技术,特异性灵敏,准确度高,操作快速、简便,在食品安全检测中具有重要应用价值。
关键词:拟态弧菌;聚合酶链式反应;变性高效液相色谱法
    变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquidchromatography,DHPLC)是在高效液相色谱法的基础上发展起来的、在分子DNA 水平上进行微生物检测的一种新方法[1]。DHPLC 技术可以稳定、准确地从种属和菌株水平识别微生物,弥补传统表型识别方法的缺陷[ 2 ] 。是检测混合微生物样本的全自动化操作分析平台,不仅能鉴定常见的微生物,还能鉴定不常见的、
苛刻的、厌氧的细菌。DHPLC 根据特定样本中各种微生物的峰形对目标菌进行鉴定,样本的峰形谱可用于定性和定量监测样本中各种微生物的动态变化。本实验拟建立PCR-DHPLC[71]技术在非变性条件下对食品中致病菌——拟态弧菌进行快速检测的方法。样品仅需快速增菌培养几小时,即可直接取样品增菌液检测拟态弧菌。与传统检测方法进行比较,结果表明PCR-DHPLC 方法准确度为100%,说明该PCR-DHPLC 方法具有广泛而良好的适用性。
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