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关键词：
电解水;制氢;酸性离子液体;催化活性;活化能
发表时间：
2017-02-07 16:50:18
高分辨飞行时间质谱在蛋白质组学相对定量分析中的应用_洪晓愉
SDY | -> | 475| 0| 0.693924MB |定量蛋白质组学;高分辨飞行时间质谱;打击训一数;信号强度;无标记定量
了解特定生物学过程，不仅要知道所涉及的分子种类，还需要明晰它们的含量及动态变化。具有高
通量、高灵敏度、高线性范围和较高准确度的定量蛋白质组学近年来发展迅速，在生物学和医学研究中
的应用日益广泛[D -al。按照不同的定量原理，定量蛋白质组学技术可分为依据凝胶成像和液相色谱领
谱信号强度两种定量技术。前者主要利用双向电泳(银染或考染)或双向荧光差异凝胶电泳
( DIGE) }5}，在蛋白质水平上进行定量分析，蛋白质的定量和序列鉴定是两个独立的步骤，其优点是差异
蛋白被真正分离，并且更为直观，但是操作繁琐耗时，各种翻译后修饰的存在使得“单一”蛋白点上有可
能是分子量和等电点非常接近的蛋白质的混合物。随着多维液相色谱领谱技术和数据处理软件的不
断发展，基于质谱的定量蛋白质组学技术逐渐成为该领域的主流技术。
基于质谱的定量分析是将蛋白质通过特异性酶切水解成适于质谱检测的肤段，在进行肤段序列鉴
定的同时提取质谱信号的强度信息，然后将来自肤段的定量信息还原成蛋白质的定量信息。根据定量
分析目的，又分为以三重四级杆质谱为平台的绝对定量分析(SRM) }6}和在其它串联质谱上实现的相对
定量分析[00。绝对定量分析是对己知蛋白和肤段的靶向测定，灵敏度高，抗干扰性强，但通量较小并需
要合成目标肤段。目前应用更为广的方法是在高分辨质谱上同时实现蛋白质的鉴定和定量分析，按照
定量分析策略，后者又可分为稳定同位素标记定量分析[[A]和无标记定量分析[[9]两类[[I O - 12]。典型的标
记定量分析方法有两种:需要含同位素标记的细胞培养基(SILAC )和需要增加蛋白质处理步骤的
iTRAQ }I4}方法，虽然成本较高，但由于其稳定性和准确性较高，目前被许多研究者在发现蛋白质组学中
所采用。非标定量分析方法包括信号强度法和谱图计数法，其在实验操作上与定性分析相似，但要求复
杂的数据提取和处理方法[[IS]，并且每个样品需至少平行测定3次，以消除各种偶然误差，耗时较长。
SILAC和iTRAQ分别根据一级和二级质谱信号进行定量分析。近年来，根据三级串联质谱信号定量分
析和各种非数据依赖型采集方法的发展很快[[I6]。
通量、高灵敏度、高线性范围和较高准确度的定量蛋白质组学近年来发展迅速，在生物学和医学研究中
的应用日益广泛[D -al。按照不同的定量原理，定量蛋白质组学技术可分为依据凝胶成像和液相色谱领
谱信号强度两种定量技术。前者主要利用双向电泳(银染或考染)或双向荧光差异凝胶电泳
( DIGE) }5}，在蛋白质水平上进行定量分析，蛋白质的定量和序列鉴定是两个独立的步骤，其优点是差异
蛋白被真正分离，并且更为直观，但是操作繁琐耗时，各种翻译后修饰的存在使得“单一”蛋白点上有可
能是分子量和等电点非常接近的蛋白质的混合物。随着多维液相色谱领谱技术和数据处理软件的不
断发展，基于质谱的定量蛋白质组学技术逐渐成为该领域的主流技术。
基于质谱的定量分析是将蛋白质通过特异性酶切水解成适于质谱检测的肤段，在进行肤段序列鉴
定的同时提取质谱信号的强度信息，然后将来自肤段的定量信息还原成蛋白质的定量信息。根据定量
分析目的，又分为以三重四级杆质谱为平台的绝对定量分析(SRM) }6}和在其它串联质谱上实现的相对
定量分析[00。绝对定量分析是对己知蛋白和肤段的靶向测定，灵敏度高，抗干扰性强，但通量较小并需
要合成目标肤段。目前应用更为广的方法是在高分辨质谱上同时实现蛋白质的鉴定和定量分析，按照
定量分析策略，后者又可分为稳定同位素标记定量分析[[A]和无标记定量分析[[9]两类[[I O - 12]。典型的标
记定量分析方法有两种:需要含同位素标记的细胞培养基(SILAC )和需要增加蛋白质处理步骤的
iTRAQ }I4}方法，虽然成本较高，但由于其稳定性和准确性较高，目前被许多研究者在发现蛋白质组学中
所采用。非标定量分析方法包括信号强度法和谱图计数法，其在实验操作上与定性分析相似，但要求复
杂的数据提取和处理方法[[IS]，并且每个样品需至少平行测定3次，以消除各种偶然误差，耗时较长。
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