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关键词：
聚合离子液体;石墨烯;固相萃取;有机磷农药
发表时间：
2017-02-07 11:47:20
血液中_15_N标记氨基酸同位素丰度_雷雯
宋丹杨 | -> | 661| 0| 0.952782MB |同位素丰度;氨基酸;气相色谱刁贡谱联用;氮同位素标记
在生物医学领域，稳定同位素标记氨基酸常作为示踪剂对生物体的新陈代谢[Dl进行表达或用于蛋白
质合成率[Czl的测定，同时也被用于蛋白质定量组学[C37。通过将标记的氨基酸如甘氨酸}5 N、丙氨酸}5N、谷
氨酸}5N等经静脉注射入生物体内，通过测定血液、尿液或组织样品中同位素丰度则可计算出蛋白质的更
新率、合成率和分解率等，而尿素是代谢过程中的最终产物，因而监测尿素}5Nz的同位素丰度也可提供相
应的代谢信氰((Cell》杂志近期报道了以同位素标记的谷氨酞胺和葡萄糖作为示踪剂，得到在MYC癌基
因表达及缺氧的条件下细胞中谷氨酞胺的代谢情况，从而指导癌症疾病的靶向治疗的研究[#]。血液或组
织液中标记氨基酸同位素丰度的准确测定直接影响到了代谢过程的精准表达。气体同位素质谱法可用于
化学纯度较高的单一氨基酸同位素丰度的测定[[5]。而实际血液或组织液样品中基质较为复杂，氨基酸含
量较低C} -s7，其同位素丰度的检测则是难点所在。Nakamura等[9]使用LC}VIS /MS分析了老鼠血浆氮代谢
循环中多种氨基酸‘5N与‘4N的同位素丰度比((M +1) /M)，从而反应出‘5N在老鼠不同部位的富集情况。
江骥等Dol采用衍生化汽相色谱领谱(GC }VIS)联用法测定了血浆中‘5N标记甘氨酸的同位素丰度。在‘;C
代谢流分析中，有报道使用GC}VIS测定了大肠杆菌、酵母等微生物中或菌体蛋白中‘;C标记氨基酸同位素
丰度[o}.}z}。目前还未有GC }VIS同时测定血浆或组织液中‘5N标记多种氨基酸同位素丰度的报道。本研究
采用GC}VIS法研究血液中‘5N标记丙氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和尿素的同位素丰度同时测定的方
法，首先在优化的GC}VIS条件下对上述5种化合物进行分离，分析每种氨基酸衍生物在EI谱图的碎裂规
律，找出适用于‘5N同位素丰度计算的碎片离子，建立同位素丰度计算方法;进而对高丰度氨基酸和尿素
对照品进行测定，以验证方法的准确性;最后对实际血液样品进行分析。
质合成率[Czl的测定，同时也被用于蛋白质定量组学[C37。通过将标记的氨基酸如甘氨酸}5 N、丙氨酸}5N、谷
氨酸}5N等经静脉注射入生物体内，通过测定血液、尿液或组织样品中同位素丰度则可计算出蛋白质的更
新率、合成率和分解率等，而尿素是代谢过程中的最终产物，因而监测尿素}5Nz的同位素丰度也可提供相
应的代谢信氰((Cell》杂志近期报道了以同位素标记的谷氨酞胺和葡萄糖作为示踪剂，得到在MYC癌基
因表达及缺氧的条件下细胞中谷氨酞胺的代谢情况，从而指导癌症疾病的靶向治疗的研究[#]。血液或组
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化学纯度较高的单一氨基酸同位素丰度的测定[[5]。而实际血液或组织液样品中基质较为复杂，氨基酸含
量较低C} -s7，其同位素丰度的检测则是难点所在。Nakamura等[9]使用LC}VIS /MS分析了老鼠血浆氮代谢
循环中多种氨基酸‘5N与‘4N的同位素丰度比((M +1) /M)，从而反应出‘5N在老鼠不同部位的富集情况。
江骥等Dol采用衍生化汽相色谱领谱(GC }VIS)联用法测定了血浆中‘5N标记甘氨酸的同位素丰度。在‘;C
代谢流分析中，有报道使用GC}VIS测定了大肠杆菌、酵母等微生物中或菌体蛋白中‘;C标记氨基酸同位素
丰度[o}.}z}。目前还未有GC }VIS同时测定血浆或组织液中‘5N标记多种氨基酸同位素丰度的报道。本研究
采用GC}VIS法研究血液中‘5N标记丙氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和尿素的同位素丰度同时测定的方
法，首先在优化的GC}VIS条件下对上述5种化合物进行分离，分析每种氨基酸衍生物在EI谱图的碎裂规
律，找出适用于‘5N同位素丰度计算的碎片离子，建立同位素丰度计算方法;进而对高丰度氨基酸和尿素
对照品进行测定，以验证方法的准确性;最后对实际血液样品进行分析。
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