高效液相色谱_蒸发光散射检测法检测天然牛黄与酶促牛黄中胆固醇含量

刘玉坤 | -> | 927| 2| 0.211383MB |天然牛黄,酶促牛黄,胆固醇,含量测定,高效液相色谱-蒸发光散射测定法

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[摘要] 目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测( HPLC-ELSD) 法,测定并比较天然牛黄与酶促牛黄中胆固醇的含量。方法色谱柱为Diamonsil C18柱( 250 mm × 4. 6 mm,5 μm) ; 以乙腈-异丙醇( 1 ∶ 1 ) 为流动相,流速1. 0 mL·min-1 ; 漂移管温度67. 5 ℃,气体流速1. 7 L·min-1。结果胆固醇浓度在4. 0 ~ 20. 0 μg·mL-1 范围,浓度对数( logC) 与峰面积对数( logA) 呈良好的线性关系logA= 1. 541 2logC-2. 525 ( r = 0. 999 2) ; 低、中、高浓度平均回收率分别为98. 41%,100. 04%,96. 46%,RSD 分别为0. 63%,1. 67%,1. 03%。结论该法简便、准确,专属强,可用于牛黄、牛黄替代品及其制剂的质量控制。
    胆固醇广泛分布于人和动物的各种组织中,是维持机体正常生理功能所必需的重要物质[1]。胆固醇不仅在中枢神经系统的发育和功能活动中发挥重要作用,也参与动脉粥样硬化等心血管疾病的发生发展过程。目前胆固醇的含量测定方法有比色法、气相色谱法[2]、酶水解法[3]、傅立叶变换-衰减全反射红外光谱法[4]及高效液相色谱( HPLC) 法[5]等。比色法是胆固醇含量测定的传统方法,样品前处理操作繁杂,样品中脂肪的提取比较耗时,所需试剂多,成本较高,结果易产生偏差,应用受到了限制。气相色谱法测定胆固醇,分离效果好,选择性高,但因样品中常有脂类物质共存,需对样品进行皂化处理,操作繁琐,易引起偏差。傅立叶变换-衰减全反射红外光谱法和酶水解法由于所需仪器限制,目前较少采用。在已报道的采用HPLC 法测定胆固醇含量的方法中,多采用末端吸收测定,末端吸收受所用溶剂截止波长的限制,现已较少采用。笔者建立的高效液相色谱-蒸发光散射检测法( high performance liquid chromatography- evaporative light scattering detection,HPLC-ELSD) 法,对牛黄中的
胆固醇含量进行了测定。样品不需衍生化,操作简便,方法灵敏、专属、精密。
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