基于温敏型材料的固定化酶的制备及其在蛋白质组快速分析中的应用_张倩

SDY | -> | 452| 0| 1.732312MB |固定化酶

SDY SDY | 文档量 |浏览量228341

    蛋白质组学通过对从细胞、组织或有机体中提取的蛋白质进行规模化分析鉴定,系统性的获得蛋白
表达、修饰、组成和定量的变化信息[D,zl,己成为生物学和医学研究中的热点领域。目前,蛋白质组学中
应用最为广泛的研究策略是基于质谱的“鸟枪法”策略,该策略利用蛋白酶将蛋白样品酶解为肤段混合
物,然后通过液相色谱刁贡谱联用}.C }S)分析鉴定肤段样品,最后将所得质谱数据在数据库中搜库检
索,从而获得相应蛋白质的详细信息[C3,47。在这一策略中,蛋白质的定性、定量信息都是通过对其酶解
肤段产物进行分析鉴定得到的,因此,蛋白质的酶解成为该研究策略中至关重要的一步。在“鸟枪法”
策略中,目前广泛使用的溶液酶解方法所需时间过长42 }24 h),严重限制了样品的处理速度和通量。
而且溶液酶解中的蛋白酶只能单次使用,无法回收,导致使用成本较高。固定化蛋白酶试剂可避免蛋白
酶自身酶解效应,并且显著提高了酶与底物的投料比,缩短了反应时间,提高了酶解效率;另外,固定化
蛋白酶可回收重复使用,大大降低了蛋白酶的使用成本[CS - 7]。目前己报道了多种不同的蛋白酶固定化
方法及固定化载体材料,如介孔材料[[A, 9]、毛细管石英柱[[I0, I I]、芯片材料[[I2, 13]、二氧化硅材料[[14,15]或磁
性纳米颗粒[[16, 17]。但是,目前所使用的固定化载体多为固相材料,固定化蛋白酶与溶液中的蛋白质底
物在异相体系中进行酶解反应,固液界面的传质阻力和固相材料的空间位阻限制了固定化酶与底物的
碰撞和酶解效率的进一步提高。
    针对上述技术瓶颈,本研究提出并发展了基于温敏聚合物载体的固定化蛋白酶,利用温敏聚合物的
温度敏感特性,通过控制温敏聚合物固定化蛋白酶所处环境温度使其在溶解和不溶解间相互转换,从而
在溶液中呈现不同状态,以达到“均相酶解,异相分离”的目的。温度敏感型聚合物水溶液通常具有相
转变温度,其中一类为最高临界溶解温度QJCST)型,当环境温度高于其相转变温度时,聚合物在水溶液
中呈完全溶解状态;当环境温度达到或低于该聚合物的相转变温度时,聚合物开始聚集,析出沉
淀D s, l97。本研究以N俩烯酞甘氨酞胺4VAGA)为温度响应基团,合成了具有UCST温度响应能力的
SDY发布的其他共享资料
    5 色谱币 下载

基于温敏型材料的固定化酶的制备及其在蛋白质组快速分析中的应用_张倩

(1732.312K)

所需色谱币: 5

您持有: $userGold色谱币,完成任务赚取色谱币

立即下载

友情链接(联系QQ:47140047)
关于我们  经营理念  业务合作  联系我们  法律声明  网站建议  网站导航  帮助中心
Copyright © 色谱世界 版权所有 鄂ICP备19022139号-2