生物荧光传感器检测环境水样中氨基甲酸酯类农药残留_张昊

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    氨基甲酸酷类农药是农作物防治虫害的常用农药〔i7,常用的如吠喃丹(2}3氢一,2甲基一笨
并吠喃基一甲基氨基甲酸酷)、西维因((1基)W一甲基氨基甲酸酷),它们是主要的氨基甲酸酷类杀虫
剂,能被植物的根、茎、叶吸收,并在作物内传导;可经消化道、呼吸道和皮肤被人吸收,吸收后主要分布
于肝、肾、脂肪和肌肉中。氨基甲酸酷类农药是一种抑制体内胆碱酷酶的神经毒素,具有潜在致癌、致
畸、致突变作用Cz_al。近年来,农药残留和食品安全的问题备受关注。
    目前,氨基甲酸酷类农药残留的检测方法主要用于蔬菜和水果等样品,环境水体中氨基甲酸酷类农
药残留的快速检测鲜有报道。我国现行氨基甲酸酷类农药国家标准检测方法有色谱法[Cs. 07、胆碱酷酶
抑制法[Ll等。色谱法定量准确,但仪器体积大,对检测人员的技术要求高;胆碱酷酶抑制法快速、便捷,
但灵敏度低,检出限仅为mg /kg级。因此建立灵敏、简便、低成本的环境水体中氨基甲酸酷类农药残留
J决速检测方法对环境监测领域意义重大。
    近年来,非细胞体系生物荧光传感器以快速、灵敏、高通量的优点,在快速检测领域受到广泛关注。
非细胞体系是在细胞抽提物的酶系中合成蛋白质的体外系统,具有稳定、快速、高效等特点[s]o  Xiong
等[9]将绿色荧光蛋白基因同源重组到肇丸酮丛毛单胞菌中C.体激素特异性响应功能基因下游,构建了
定量检测幽体激素的非细胞体系生物荧光传感器,灵敏度达到1.0 ng/L。本研究组在质粒pI}18的顺式
月半乳糖普酶启动子基因下游,依次插入了+<体激素及多环芳烃的特异性响应功能基因、绿色荧光蛋白
基因,并将质粒转入大肠杆菌B L21中,构建了定量检测幽体激素及多环芳烃的非细胞体系高效生物荧
光传感器,灵敏度达到0.1 ng/L}'0}。
    本研究通过构建氨基甲酸酷类农药降解菌HS基因组文库,筛选出氨基甲酸酷类农药特异性响应
功能基因的调控序列,与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因连接,构建了检测氨基甲酸酷类农药残留的
非细胞体系生物荧光传感器,用于环境水体中的农残检测。当样本中含有氨基甲酸酷类农药时EGFP
表达并发光,荧光值在一定范围内与农药含量呈正相关。
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