高效液相色谱_同位素稀释质谱法定量分析人生长激素_金有训

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    人生长激素(Human growth hormone } hGH)是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的蛋白质,是一种肤类
激素,是诊断巨人症、肢端肥大症、遗传性生长激素生成缺陷所致的生长激素缺乏症最常用的指标[Dl
    目前,临床检验中针对重组hGH ( rhGH)的检测方法有酶联免疫法[Cz.37、时间分辨荧光免疫分析
法[t4} , LC }VIS / MS法[Cs. }7、毛细管电泳结合紫外和质谱技术[Ll也为检测rhGH滥用后的浓度的差异提供
了新途径。但这些方法都是相对测定法,耗时长、费用高、操作复杂。因此,亚需建立具有操作简单,高
准确度和高精密度hGH的参考测量方法。
    目前,纯蛋白的定量方法主要有氨基酸分析[[A]、质量平衡[[9]、定量核磁[I0]、质谱法[[I I」以及同位素稀
释质谱法[[I2, 13]氨基酸分析法一般在氨基酸分析仪上通过紫外或荧光检测,因此易受干扰,操作比较
复杂;质量平衡法虽然具有高准确度,但其在标准物质定值方面具有一定的局限性;定量核磁法具有无
需待测物对照品、样品预处理步骤简单、测定快速准确、专属性强、不破坏样品等优点,但灵敏度较低;同
位素稀释质谱法具有操作简单,高准确度和高精密度的特点[[I3]。
    本研究采用快速蛋白液相色谱分离纯化hGH,再采用SDS}AGE和超高分辨能力FTICR对hGH进
行纯度表征和分子量测定,为蛋白质结构的鉴定奠定基础。采用KINETEX C I、色谱柱在5 min内快速分
离3种氨基酸(脯氨酸、撷氨酸和苯丙氨酸)。本方法具有操作简易、分析速度快、重现性较好、实用性
强等特点,并且准确可靠。以此为基础建立了hGH的HPLC}DMS联用高准确度绝对定量方法。
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